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标题: 这是什么原因造成的？ [打印本页]

作者: dingwei 时间: 2012-6-14 20:52 标题: 这是什么原因造成的？

排除没有加到一抗、检测系统和DAB。

作者: shanghainese 时间: 2012-6-14 22:06

请说明一下详细情况。

作者: dingwei 时间: 2012-6-14 22:29

1、0。3%甲醇双氧水阻断20分钟。蒸馏水洗
2、EGTA水煮抗原修复25分钟后，快速拿出放入冷水冷却。
2、一抗、二抗、DAB加的量都很多，肯定覆盖住，没有干燥。
3、结果出来，7块组织边缘有几块都有不着色现象。几张片子都一样。

作者: xiangyanhere 时间: 2012-6-15 09:44

丁老师：我前段时间也遇到了这个问题，不过我是集中在一侧。会不会是在二抗滴加的时候，组织上还有少量水珠，正好湿盒略微倾斜，水珠流于一侧较多，导致抗体稀释，表达不佳引起

作者: shanghainese 时间: 2012-6-15 13:51

引用:

原帖由 dingwei 于 2012-6-14 22:29 发表
1、0。3%甲醇双氧水阻断20分钟。蒸馏水洗
2、EGTA水煮抗原修复25分钟后，快速拿出放入冷水冷却。
2、一抗、二抗、DAB加的量都很多，肯定覆盖住，没有干燥。
3、结果出来，7块组织边缘有几块都有不着色现象。几张 ...

照片里这几个组织怎么这样圆? 是不是做tissue array?

[ 本帖最后由 shanghainese 于 2012-6-15 22:26 编辑 ]

作者: dingwei 时间: 2012-6-15 22:43

是的

作者: shanghainese 时间: 2012-6-16 12:03

引用:

原帖由 dingwei 于 2012-6-15 22:43 发表
是的

估计是第二次包埋时，外围的组织细胞受到影响，抗原发生了不可逆反应。

作者: dingwei 时间: 2012-6-16 13:15

排除此原因，其中有一张做同样的抗体，全部表达都是好的。

作者: 王华 时间: 2012-6-16 14:06

脱蜡剂、酒精是新换的吗？

作者: shanghainese 时间: 2012-6-17 10:29

引用:

原帖由 dingwei 于 2012-6-16 13:15 发表
排除此原因，其中有一张做同样的抗体，全部表达都是好的。

是同一个蜡块吗?
如果是同一个蜡块, 有问题的切片在先，还是在后？

作者: dingwei 时间: 2012-6-18 16:25

同一个蜡块，和切片次序没有关系，和脱蜡也没有关系。

作者: shanghainese 时间: 2012-6-19 12:19

会不会是修复时修复液干了或是气泡引起的？

作者: 天涯无风 时间: 2012-6-20 12:25

手工染色吗，有用组化笔吗

作者: guting2006 时间: 2012-7-2 12:42

什么原因，我也想知道。呵呵

作者: dingwei 时间: 2012-7-2 13:15

引用:

原帖由 shanghainese 于 2012-6-19 12:19 发表
会不会是修复时修复液干了或是气泡引起的？

你基本上找到了原因。是抗原修复后，水温还没有冷到切片所需的温度就直接把片子拿出来，导致极少量的组织边缘迅速干燥，干燥部份的抗原迅速丢失。

作者: guting2006 时间: 2012-7-2 15:27

哦，原来如此，看来要彻底冷却到室温啊

作者: iamyueyueyue 时间: 2012-7-2 17:54

抗原修复后，水温还没有冷到切片所需的温度就直接把片子拿出来，导致极少量的组织边缘迅速干燥，干燥部份的抗原迅速丢失-------------学习了

作者: lius 时间: 2012-7-7 17:16

受教了！

作者: 135566 时间: 2012-7-8 20:45 标题: 回复 15# 的帖子

丁老师，您好，抗原修复后，水温冷到切片所需的温度，我想问下大约多少温度才是最佳的所需温度？

作者: dingwei 时间: 2012-7-9 07:43

37度以下吧，在没有达到的情况下，可以直接加冷水至冷

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