标题:
CD133抗体
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作者:
2836yzzy
时间:
2012-7-4 10:33
标题:
CD133抗体
那位老师做过CD133抗体，我买了
德国美天旎公司浓缩型的，我是做得脐血提纯的干细胞，我始终是阴性的。
1
、标本来自人的脐血提纯干细胞
2
、干细胞涂片
3
、
95%
乙醇固定
60
分钟；
4
、
60
℃
考半小时。
6
、高压
EDTA
（
PH=9.0
）修复
1~1.5
分钟。
7
、蒸馏水
2 min
。
8
、
3%H2O2
孵育
10 min
。
9
、
蒸馏水
3
次各
2 min
。
10
、一抗
(CD133)
孵育（抗体稀释液配制，滴度
1
：
5
，
1
：
10
，
1
：
20
，
1
：
50
，
1
：
,100
湿盒）
4
℃
过夜（同样稀释度，同时以做过
37
℃
一小时）。
11
、
PBS
清洗标本
3
次各
2 min
。
12
、二抗工作液孵育基因公司兔
/
鼠通用型试剂盒
37
℃
30 min
。
13
、
PBS
清洗标本
5
次各
2 min
。
14
、
DAB
显色（避光，镜下观察至棕色）约
10~15min
。
备注：组织脱蜡到水，高压
EDTA
（
PH=9.0
）修复
1~1.5
分钟以下步骤相同。
作者:
infi
时间:
2012-7-4 10:57
会不会是大鼠和小鼠的不同导致的？
作者:
infi
时间:
2012-7-4 10:58
其实这个过程只要是做别的是成功的，那就没什么大问题。感觉还是来源有问题。
作者:
shanghainese
时间:
2012-7-4 11:42
http://www.miltenyibiotec.com/download/protocols_cell_analysis_special_en/908/SP_CD133_IHC.pdf
作者:
shanghainese
时间:
2012-7-4 11:43
再有问题找Miltenyi.
作者:
2836yzzy
时间:
2012-7-4 14:52
我是人来源的标本，以前去在中山金桥买的CD133可以做出来，他们家不买这个抗体了，我就换了这家公司。浓缩型的 就是怎么找比例都不行。一抗说明书上是mouse来源的IgG1，二抗我用的是基因公司兔/鼠通用型的
作者:
2836yzzy
时间:
2012-7-4 15:01
同一批中其他的抗体没有问题，都可以做出来，
作者:
2836yzzy
时间:
2012-7-4 15:05
我用组织结肠癌的图片
作者:
shanghainese
时间:
2012-7-4 21:58
http://bloodjournal.hematologyli ... /5002.full.pdf+html
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