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标题: 冰冻切片的几个疑问 [打印本页]

作者: dingwei 时间: 2012-7-5 08:37 标题: 冰冻切片的几个疑问

我们经常说冰冻切片组织不能用水冲，否则会引起冰晶。包埋剂如胶水，含有水份，所以也会引起冰晶，这样的理论对不对？
我今天特意买了一个猪肾、一块猪肝，取材取好后，分别用立即冷冻、取好后浸在水里十分钟后拿出再冷冻二种方法，然后分别采用OCT包埋和胶水包埋，结果显微镜下用肉眼看不出什么区别。
而且用胶水切的片要比OCT的平整，因为OCT的质地比较韧，容易出现切片上有横纹；OCT的收缩度往往比组织的大，切片上组织的面积往往大于OCT的外圈，因此在粘片时经常会有皱折。而胶水包埋的切片就非常平整。
所以，就这些问题我希望大家能够回去做一下，讨论一下，看看问题的真实现象是什么。
下面是用胶水做包埋剂切的片子：

作者: dingwei 时间: 2012-7-5 10:51

水中浸了十分钟后的肝组织，冰晶并不明显，但细胞好象有点水肿变性。

作者: dingwei 时间: 2012-7-5 11:08

冷冻速度慢引起的冰晶

作者: 王华 时间: 2012-7-5 22:49

我也要做做，自己感觉一下。
做完再来谈谈.......

作者: myzh 时间: 2012-7-6 20:35

好帖

作者: zenglihua 时间: 2012-7-13 20:01

学习了

作者: LF100191 时间: 2012-7-19 23:57

1.要进行冰冻切片的材料并非完全不能用水洗
2.并非所有的材料都会产生冰晶，通常容易产生冰晶的标本如骨骼肌、卵巢等
3.我们通常所说质地不够均匀的材料，或含纤维多或有空隙等。类似肝脏、肾脏等一般不太容易产生冰晶。

以上体会供参考。

作者: LF100191 时间: 2012-7-19 23:58

补充：形成冰晶与否冷冻速度有关。

作者: 波斯猫茜茜 时间: 2012-8-6 18:15

冰冻切片的材料水洗了也没关系，表面的都切了，形成冰晶与否是与冷冻速度有关。

作者: 坦克 时间: 2012-8-12 21:31

请问丁老师你们用的什么牌子的胶水

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作者: 坦克 时间: 2012-8-12 21:32 标题: 请问丁老师你们用的什么牌子的胶水:D :D :D 速求

请问丁老师你们用的什么牌子的胶水

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作者: q317476148 时间: 2012-8-14 16:35 标题: 请问上海哪里可以提供代做冰冻切片？

请问上海哪里可以代做冰冻切片，本实验室没有做切片的设备。望各位提供点信息

作者: dingwei 时间: 2012-8-14 21:56

引用:

原帖由坦克于 2012-8-12 21:32 发表
请问丁老师你们用的什么牌子的胶水速求

西子牌

作者: 坦克 时间: 2012-8-20 17:46 标题: 谢谢诶

作者: 王华 时间: 2012-9-1 20:39 标题: 先提两个问题给有兴趣的同志们思考一下

1、冷冻组织如何操作才算是速冻？
2、大部分人是使用冰冻切片机配给的速冻头压在组织上进行速冻，这样速冻的组织内部各层面形态是一致的吗？

先思考一下下......

我的图片待会再发.......

作者: 泡泡泡芙88 时间: 2012-9-1 21:39

如果是消化道的用速冻头压切片内膜层较厚，腺体较多，结构像癌吧。

作者: 王华 时间: 2012-9-2 18:02 标题: 回复 16# 的帖子

冰冻切片如果没做好，对诊断的最大挑战就是：癌看起来不像癌，不是癌的又有点像癌......

好的冰冻切片的目标是：最大限度的保持组织细胞原始的形态结构！

问题是，我们技术员是否对以下的问题有清楚的认识呢：
1、一块新鲜的组织在冷冻的过程中会出现什么改变？
2、怎样的冷冻方式与制片流程才能尽可能的不造成“制片假象”？
3、什么样的现象属于“制片假象”，什么样的现象是“原始现象”呢？

作者: 王华 时间: 2012-9-2 19:33

关于“冰冻切片的几个疑问”的实验部分结果交流一下
第一次实验：买一个猪肾
一、取材2块后，分别采用OCT包埋和胶水包埋，速冻头速冻。
制片效果：无明显区别。见图一

二、取材2块后，采用胶水包埋，一块使用冷冻头速冻，一块不用冷冻头，放在速冻台上使其冻住。
制片效果：明显差异。见图二、图三

作者: 王华 时间: 2012-9-2 19:36

回去查看文献与有关结晶化学的知识后，做了第二次实验猪肾一个，取材三块。

第一块：组织托先预冷，加包埋剂，放组织，立即用冻锤压上冷冻。
第二块：组织托先预冷，加包埋剂，放组织，不加冻锤，放在速冻台上直到冻住。
第三块：组织托不预冷，加包埋剂，放组织，立即放在速冻台上，立即压上冻锤冷冻。

三块组织采用一样的切片方式，每块组织切十张。
粗刨厚度：30微米
切片厚度：6微米
贴片后立即固定。

第一张：粗刨2-3次，切片一张，尽量要到接近表面的层面
第二张至第十张：粗刨10次，切片一张，再粗刨10次，再切一张，直至第十张完成，切到第十张切片时，组织已经见底了。

结果：
第一块与第三块组织切片的变化效果相似，
图一至图十为由浅至深的10张切片中央的组织形态变化，低倍镜

作者: 王华 时间: 2012-9-2 19:38

第一块与第三块组织切片，由浅至深的10张切片中央的组织形态变化，中倍镜

作者: 王华 时间: 2012-9-2 19:41

第一块与第三块组织切片，由浅至深的10张切片中央的组织形态变化，中倍镜

作者: 王华 时间: 2012-9-2 19:45

第一块与第三块组织切片，由浅至深的10张切片组织边缘的组织形态变化，低倍镜

作者: 王华 时间: 2012-9-2 19:48

第二块组织，组织中央、组织边缘、不同层面，效果都是相似的。

[ 本帖最后由王华于 2012-9-2 19:56 编辑 ]

作者: 王华 时间: 2012-9-2 20:07

过去，我们是不是想当然的认为“冷冻的组织形态结构是一致的”？
换一种思考的方式，相信会有新的发现......

希望我的实验能给大家有所启发......

有什么想法要拿出来交流一下啊，独乐乐不为乐，众乐乐才是乐哦......

作者: shanghainese 时间: 2012-9-4 11:49

冰结晶

作者: 清心 时间: 2012-9-16 10:03

请教各位老师：我用冷冻锤后就取不下来组织了，我就没敢用。另：各类组织的冷冻温度有什么要求？请不另赐教，谢谢！！

作者: dingwei 时间: 2012-9-17 07:27

引用:

原帖由清心于 2012-9-16 10:03 发表
请教各位老师：我用冷冻锤后就取不下来组织了，我就没敢用。另：各类组织的冷冻温度有什么要求？请不另赐教，谢谢！！

用冷冻锤后就取不下来组织，说明冷冻时间还不够，再多冻一会就拿得下了。

作者: 清心 时间: 2012-9-18 16:36

谢谢丁老师指教！

作者: 病理爱好者 时间: 2012-9-20 21:48

我也觉得与冰冻速度有关，跟水洗没多大的关系。

作者: 梅花 时间: 2012-9-30 17:39

王华老师的实验也给我启发，我科的冰冻片也有这种现象，用的是徕卡1950的，它没有冻头，特别是含水多的组织、取材大的组织冻得慢更会这种现象，以前的珊顿机单压缩机的，很少有这种现象，非常纳闷，请问各位，使用双压缩机的机，样本头的温度是否每例都有开？

作者: 王华 时间: 2012-9-30 21:23

是不是图片太多了，有点影响观察啊？

不用冻头的，整块组织不同层面都出现严重的细胞收缩现象。

用了冻头速冻的，从上到下，从第3张切片组织边缘开始出现细胞收缩现象，收缩现象由边缘向组织中央发展，到第6张切片，组织中央出现细胞收缩，再往下，各切面都是细胞收缩。

按每10次粗刨取一片，粗刨厚度30微米，也就是说，从上至下，约600微米深就出现边缘细胞收缩，1500~1800微米以下细胞完全都是收缩的了......

请有兴趣的同志们思考思考：
为什么会出现这样的现象？
这样的现象对我们的冰冻切片操作有什么指导作用吗？

[ 本帖最后由王华于 2012-9-30 21:28 编辑 ]

作者: 王华 时间: 2012-9-30 21:35 标题: 回复 30# 的帖子

我们也有一台徕卡1950，有冻头的啊！
为了工作方便，我们还找人另外多做了4个铜的冻头，又便宜又好用！原厂的超贵啊......

作者: 梅花 时间: 2012-10-4 22:12

谢谢王华老师的回复，准备去买几个冻头来。

作者: 秋影无声 时间: 2012-12-3 19:23

普通胶水就可以吧

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