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标题: 为什么CD133细胞核阳性 [打印本页]

作者: 2836yzzy 时间: 2012-8-30 15:04 标题: 为什么CD133细胞核阳性

1、标本是乳腺癌组织白片

2、60℃考2小时。
3、二甲苯三缸Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、脱蜡，各10分钟。
4、无水乙醇两缸，各 2分钟；
5、95%酒精二缸，各 2分钟；
6、自来水流水冲洗2分钟；
7、PBS冲洗2分钟；
8、将已冲洗干净组织放入高压锅内，加入约2000ml左右柠檬酸盐的抗原修复液（pH6.0）盖好高压盖检查安全筏，沸腾喷气1.5分钟。
9、自然冷却移至蒸馏水中浸泡2分钟。
10、3%H2O2中浸泡10分钟，蒸馏水冲洗3min×3次。
11、取出切片，擦干组织周围的水，用免疫组化油笔画圈笔在组织块周围画一圆圈，
12、PBS缓冲液冲洗。
13、加一抗(CD133)孵育（PBS配制，1：100），将切片放入孵育湿盒中，4℃的恒冰箱中过夜。
14、用PBS洗3次，每次3分钟。
15、加二抗在组织上、放入37℃恒温箱中孵育30分钟。（兔/鼠通用二抗）
16、用PBS洗3次，每次3分钟。
17、DAB显色。
18、苏木素染液复染10分钟，
19、1%盐酸酒精分化3秒钟。
20、流水冲洗5-10分钟。
21、95%酒精二缸，各 2分钟 无水乙醇两缸，各 2分钟；
22、二甲苯I、II、Ⅲ，各2分钟23、中性树胶封片
结果：我自己觉得CD133是细胞核阳性。不知道是什么原因，帮我在分析一下
这是厂家第二次给我的抗体，第一是细胞核我以为是抗体原因。

作者: shanghainese 时间: 2012-8-30 21:45

哪家公司的产品？
什么克隆？

作者: guting2006 时间: 2012-8-31 21:12

阳性对照做了吗？也是这样？

作者: 2836yzzy 时间: 2012-9-3 11:11

博士得公司兔的多克隆就是想做阳性对照可是做出细胞核阳性了

作者: 2836yzzy 时间: 2012-9-3 11:13

博士得检查过说没有问题是重新发给我的抗体新抗体还是这样想问原因

作者: shanghainese 时间: 2012-9-3 11:40

引用:

原帖由 2836yzzy 于 2012-9-3 11:13 发表
博士得检查过说没有问题是重新发给我的抗体新抗体还是这样想问原因

你把一抗多稀释几个浓度，比如1：100，1：500，1：1000和1：2000，再试一次。
如果还是有问题，建议你退货。

作者: shanghainese 时间: 2012-9-3 11:48

另外，查看一下说明书是如何建议作抗原修复的。

作者: 2836yzzy 时间: 2012-9-3 12:32

说明书上没有说是什么修复，我只稀释到1:200过都一样

作者: shanghainese 时间: 2012-9-3 13:23

引用:

原帖由 2836yzzy 于 2012-9-3 12:32 发表
说明书上没有说是什么修复，我只稀释到1:200过都一样

那就省略修复这一步骤。

作者: 2836yzzy 时间: 2012-9-3 13:55

你说不用修复我去做一下看看结果怎样谢谢

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