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标题: 冰冻脂肪组织如何进行油红O染色？ [打印本页]

作者: 笑咲 时间: 2012-10-17 15:17 标题: 冰冻脂肪组织如何进行油红O染色？

请教一下：冰冻脂肪组织如何进行油红O染色？

作者: 陌路行客 时间: 2012-10-21 11:07

也准备做这个实验，同问

作者: xkj2797xkj 时间: 2012-10-21 16:23

油红O（Oil red）染色法
固定方法：10%中性福尔马林液，10%甲醛-钙液
试剂配制：
油红O染色原液：油红O 0.5g，异丙醇（含量98%以上）100ml。充分溶解后作为储存液（染色原液）。临用前取染色原液6ml，加蒸馏水4ml，稀释后静置5-10min过滤，此液保存不能超过2h。
染色步骤：
1、冷冻切片8-15um。
2、蒸馏水稍洗。
3、置于密封的容器内用稀释后的染液滴染或浸染10-15min。
4、用60%乙醇分色。
5、水稍洗。
6、用Harris苏木精或其他苏木精浅染核30s。
7、用自来水或1%磷酸氢二钠溶液中冲洗至变蓝。
8、切片稍干后用甘油明胶封固。
染色结果：
脂肪呈红色，胞核呈蓝色。

改良油红O染色法
固定方法：10%中性福尔马林液，10%甲醛-钙液
试剂配制：
油红O染液：油红O 0.5g，50%酒精100ml。将油红O溶于酒精内，不断搅拌至完全溶解。染液置磨口瓶内保存备用。
染色步骤：
1、冷冻切片厚10-15um，切片干燥后入50%乙醇稍洗。
2、油红O染液浸染8-10min。
3、50%乙醇分色，自来水洗。
4、苏木精复染核，自来水返蓝。
5、甘油明胶封片。
染色结果：
脂肪呈红色，细胞核呈蓝色。

作者: 笑咲 时间: 2012-10-26 15:15

谢谢指导！步骤很详细，决定试试。

作者: 戈壁老狼 时间: 2012-12-31 13:12

固定方法：10%中性福尔马林液，10%甲醛-钙液

我是直接取材后液氮保存，做冰冻切片能用这种方法染色吗？谢谢了

作者: xkj2797xkj 时间: 2013-1-1 19:51

引用:

原帖由 戈壁老狼 于 2012-12-31 13:12 发表
固定方法：10%中性福尔马林液，10%甲醛-钙液

我是直接取材后液氮保存，做冰冻切片能用这种方法染色吗？谢谢了

可以！

作者: 戈壁老狼 时间: 2013-1-18 17:26 标题: 需要二甲苯透明吗

需要二甲苯透明吗

作者: xkj2797xkj 时间: 2013-1-20 00:00

引用:

原帖由 戈壁老狼 于 2013-1-18 17:26 发表
需要二甲苯透明吗

不需要，蓝化后吹干，甘油明胶封片，千万不可用中性树胶封片。

作者: 陌路的梦 时间: 2013-1-23 13:17 标题: 请教

我想请问做油红的冰冻切片可以用丙酮固定吗？固定后切片过夜再染色会不会有影响？还有我在一本书上看到是用60%的异丙醇分化，请问和60%乙醇分化，有区别吗？

作者: 没长眼 时间: 2013-3-16 19:27 标题: 回复 3# 的帖子

甘油明胶要放在温箱里，提前加热

作者: sivawong 时间: 2013-6-24 18:09

学习了~~~~~~~~~~~~

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