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标题: 请教各位老师，ki-67始终做不出来。 [打印本页]

作者: infi 时间: 2012-11-13 11:29 标题: 请教各位老师，ki-67始终做不出来。

步骤如下：确诊乳腺癌蜡块切片2um，65摄氏度烤片4小时，二甲苯、无水乙醇、95%乙醇、75%乙醇各两缸5分钟，自来水冲洗，PBS 2min*3,3%过氧化氢去离子水25摄氏度5分钟，胃蛋白酶消化液37摄氏度8分钟，EDTA高压热修复140摄氏度3分钟（阀门窜气后计时），高压锅放入冷水中冷却，阀门降下后，拿出EDTA塑料盒，放入冷水冷却，一抗4摄氏度过夜（一般16小时左右），二抗37摄氏度30分钟，DAB显色，各步骤之间均PBS 2min*3。
用上述方法做其他抗体均正常，唯独ki-67始终阴性，试过一抗25摄氏度过夜、二抗37摄氏度30分钟也不见阳性。产品为中杉金桥公司，克隆号：K-2 。
请问各位老师问题应该出在哪里。

作者: infi 时间: 2012-11-13 11:37

哦，我们用的是invsion二步法。

作者: shanghainese 时间: 2012-11-13 11:53

引用:

原帖由 infi 于 2012-11-13 11:29 发表
步骤如下：确诊乳腺癌蜡块切片2um，65摄氏度烤片4小时，二甲苯、无水乙醇、95%乙醇、75%乙醇各两缸5分钟，自来水冲洗，PBS 2min*3,3%过氧化氢去离子水25摄氏度5分钟，胃蛋白酶消化液37摄氏度8分钟，EDTA高压热修复14 ...

建议你不要用K-2 这个克隆。
推荐你用克隆MIB-1（DAKO) 或 B56 (BD)。

作者: 韩玉宁 时间: 2012-11-13 12:51

批号是哪个批次？

作者: infi 时间: 2012-11-14 10:51 标题: 回复 3# 的帖子

谢谢老师，B56这个克隆号的抗体也是中杉金桥的吗，没查到。另外，克隆号7B11的可不可以？
再麻烦您一下，P53和C-erbB-2您用的是哪个克隆号的？

作者: infi 时间: 2012-11-14 11:14 标题: 回复 4# 的帖子

产品批号：11440408

作者: shanghainese 时间: 2012-11-14 12:23

引用:

原帖由 infi 于 2012-11-14 10:51 发表
谢谢老师，B56这个克隆号的抗体也是中杉金桥的吗，没查到。另外，克隆号7B11的可不可以？
再麻烦您一下，P53和C-erbB-2您用的是哪个克隆号的？

B56这个克隆是BD的克隆，您可以BD中国分公司联系。克隆7B11，不了解不发表意见。
P53，您可以用克隆 Bp53-12。
c-erbB-2，您可以用 DAKO的多抗A0485。

作者: infi 时间: 2012-11-16 10:38

谢谢老师了！

作者: shanghainese 时间: 2012-11-16 13:19

不用客气。

作者: yuwenlong 时间: 2012-11-30 11:00

我用的是迈新的抗体，Ki-67用柠檬酸高压修复，很稳定。

作者: wangyuhuan 时间: 2013-1-7 20:05

用柠檬酸高压修复两分钟，很稳定

作者: 小惠子 时间: 2013-1-12 22:49 标题: 回复 1# 的帖子

你用的是间接修复，时间太短，你改为直接修复，高压锅里直接放修复液，片子直接放在高压锅里，加热2分30秒，就行了。

作者: 九华 时间: 2013-1-14 10:19

迈新的抗体，Ki-67用柠檬酸高压修复，很稳定。

作者: 九华 时间: 2013-1-14 10:22

引用:

原帖由 小惠子 于 2013-1-12 22:49 发表
你用的是间接修复，时间太短，你改为直接修复，高压锅里直接放修复液，片子直接放在高压锅里，加热2分30秒，就行了。

工作量太少时高压锅里直接放修复液太浪费，间接修复可以加长时间.

作者: 小惠子 时间: 2013-1-14 16:35 标题: 回复 14# 的帖子

那要是觉得直接修复浪费液体，那就只能延长时间到15min，但是现在很少有用间接修复，而且间接修复效果还是不如直接的好

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