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标题: 神经髓鞘染色及其应用（转载） [打印本页]

作者: 九日 时间: 2013-3-10 12:24 标题: 神经髓鞘染色及其应用（转载）

神经髓鞘染色及其应用

胥维勇杨　群范小莉

(四川省人民医院病理科, 成都　610072)

　　在神经组织染色中, 以髓鞘染色最为常用, 任
何因素引起的神经纤维损伤均可导致髓鞘的变性和
脱失。髓鞘在常规石蜡切片HE 染色时, 因髓鞘中
的类脂质被溶解, 而影响显示形态特点及成分。根
据正常和不同时期病变髓鞘的组织结构特点, 通过
髓鞘染色来观察正常和病理情况下髓鞘是否完整,
有无变性、坏死及修复情况, 对神经组织的病理诊
断和研究有实用意义。
1. 髓鞘的组织结构
神经纤维由轴突和被膜组成, 髓鞘是包裹在神
经轴突外面的管状鞘, 由髓磷脂所构成, 其主要成
分是类脂质和蛋白质, 类脂质含有脂肪、卵磷脂、
脑苷酯及胆固醇。在正常髓鞘中, 由于磷脂极性基
团和亲水基团的存在, 对水具有亲和力, 因此水溶
性氧化剂可渗入髓鞘, 有利于磷脂对染料的摄
入[1 ] , 采用正常髓鞘染色法可以显示出来。
当髓鞘发生变性时, 由于变性发展较为缓慢,
变性程度因损害时间长短而有所不同, 大致可分为
三期: ①髓鞘变性早期(1～10d) 病变髓鞘仍可被
正常髓鞘染色显示, 此时变性髓鞘与正常髓鞘颜色
深浅不一, 甚至颜色更深。②中期(10～60d) 髓
鞘变性形成脂质小滴, 用Marchi 锇酸染色呈黑色
阳性反应结果。③后期(60d 以上) 髓鞘彻底溃变
并被吞噬细胞所清除, 则不能再用变性髓鞘染色方
法显示阳性结果, 只能在显示正常髓鞘染色的切片
中以阴性不着色区域反映出来。
2 　　显示髓鞘的染色方法
由于髓鞘组织结构的特点, 在组织切片制作上
可根据需要采用火棉胶、冷冻和石蜡切片。传统上
髓鞘染色切片厚度为18～25μm , 多采用火棉胶包
埋切片, 主要用于解决厚切片所引起的脱片现象。
冷冻切片则主要用于显示变性髓鞘, 其目的是更好
地保存脂质小滴。现在都已很少使用, 多采用石蜡
包埋切片, 切片厚度为6～8μm , 适用于各种髓鞘
染色。
显示髓鞘染色方式有两类: ①组织切片染色
法, 如Loyez 碳酸锂苏木精法、Weil 铁明矾苏木精
法、Loxol 坚牢蓝甲苯酚紫法、Page 搔洛铬花青R
法。②组织浸渍染色法, 如Weigert 铁苏木精法、
Kuleschitzky 苏木精法、Marchi 锇酸染色法。在以
上这些染色中, 有些方法操作繁琐, 染色步骤多,
难以掌握已不常用。但Loyez、Marchi 法作为经典
方法, 染色清晰, 界线清楚。Page 法最为简便,
快速仍被广泛采用。
211 Loyez 碳酸锂苏木精染色是利用正常髓
鞘含有类脂质, 组织经铬化剂处理后, 由于铬的氧
化作用把髓鞘的类脂质聚合为不溶性物质, 而铬离
子与类脂质的聚合物再经硫酸铁铵媒染后能与碳酸
锂苏木精结合成较牢固的深蓝色色淀。同时切片中
仍可出现很浅的蓝色和灰色背景, 这是由于其它脂
质物质的存在所致, 髓鞘对染料的特异性是因为磷
脂对媒染剂的亲和力较其它脂类物质更强的缘故。
Loyez 染色也存在着染色时间长, 切片厚极易造成
脱片和难以掌握分化程度而造成染色失败的现象。
此时可采用: ①将原切片厚度从10～20μm 调整为
6～8μm , 同时使用APES 或PL P 粘附剂以防脱片。
②使用超声波或微波技术以缩短染色时间[2 ,3 ] 。③
分化在显微镜下控制, 改用2 %硫酸铁铵为分化
剂。
212 搔洛铬化青R 染色是显示正常髓鞘的另
一种方法。搔洛铬花青R 能与硫酸铁铵结合形成
染料—金属复合物, 经甲醛固定后的髓鞘类脂质能
与这种复合物牢固地结合而着色。值得注意的有:
①不宜采用含铬盐的固定液固定, 这会造成染色效
果不佳。②分化是最关键的一步, 分化不够髓鞘难
以与周围组织界线清楚; 分化过度髓鞘着色浅淡,
影响对髓鞘的观察。
213 在显示正常髓鞘时也可使用一些酸性染
料, 如金橙黄、藻红、丽春红4R , 这些染料可被
磷脂所摄入, 从而显示髓鞘[1 ] 。近年来有文献报
道采用橙黄G、丽春红G、水溶性猩红等酸性染料
显示正常髓鞘的染色方法[4～6 ] 。但它们的染色机
制却与传统方法截然不同, 其机制是由于髓鞘结构
中含有羧基和氨基等离子基团, 这些酸性基和碱性
基具有两性游离等电点的特性, 即神经组织髓鞘在
酸性染液中呈碱性, 带正电荷, 能与带负电荷的酸
性染料结合, 从而使髓鞘着色[4～6 ] 。这些酸性染
料的使用使髓鞘染色方法更加完善, 染色步骤和操
作更简便。同时应注意: ①应采用4 %甲醛一钙液
(无水氯化钙1g , 40 %甲醛10ml , 蒸馏水90ml)
固定对神经组织有较好固定作用, 同时有助于保存
髓鞘磷脂。②切片厚度为6～8μm , 切片太厚容易
造成浓染; 太薄着色不清晰, 灰质、间质分界不
清。
214 除正常髓鞘染色外, 当髓鞘在组织结构
上发生变化时可采用变性髓鞘Marchi 锇酸染色法。
此法是根据正常髓鞘经铬盐氧化后, 对锇酸不起反
应, 而变性髓鞘含有脂肪酸, 不受氧化剂的影响,
因此被还原而呈黑色阳性反应。锇酸染色是一种金
属浸渍染色法, 是粒子沉淀作用或金属与某种组织
要素所产生的沉着物质, 并非真正染色。应考虑
到: ①作变性髓鞘染色的组织, 首先在含重铬酸盐
固定液中固定后, 再用锇酸与重铬酸盐混合液浸
渍, 浸渍时应避光在暗处作用6～7 天, 其间更换
新液1～2 次。②由于锇酸的渗透力不强, 组织块
厚度不应超过2mm。③已浸染的组织用流水冲洗
后可作冷冻切片。如作石蜡切片应迅速脱水包埋,
以免组织褪色。
3. 髓鞘染色的应用
神经原纤维变性, 这种变性不是继发性神经细
胞的坏变和外伤性神经纤维断裂, 而是由于神经纤
维本身营养和代谢障碍所引起, 可出现髓鞘变性脱
失和轴突变性。如亚急性脊髓联合变性(维生素
B12缺乏引起的视神经乳头变性疾病) 和多发性硬
化(以中枢神经系统炎性脱髓鞘为特征的自身免疫
性疾病) 的神经纤维的变化。
在神经纤维变性时, 当成束神经纤维发生变性
时, 神经髓鞘发生形态上的改变, 髓鞘肿胀, 失去
屈光性, 以后断裂, 形成脂质空泡, 变性的神经纤
维丧失正常神经纤维染色性质。
在神经性炎症和化学物质中毒, 均可导致髓鞘
的变性、崩解或脱失, 形成胆固醇酯和中性脂质的
颗粒及小脂滴。
在外来因素如重力压迫、撞击、挫伤、切割或
剧烈牵引均可引起神经的急性损伤, 而造成髓鞘扭
曲、断裂, 继而出现节段性脂髓鞘。
在外伤、肿瘤、中毒、烧伤或高血压引起的脑
水肿, 在水肿区髓鞘肿胀、弯曲, 轴突常不规则增
粗成串状变化, 严重时轴突断裂, 并有脱髓鞘。
参　考　文　献
〔1〕Peares ACG (马仲魁译) . 组织化学(第2 卷: 分析技
术) . 北京: 中国医药科技出版社, 1990 , 3902430
〔2〕郑辉, 沈明, 杨晓静. 微波技术在髓鞘染色中的应用.
临床与实验病理学杂志, 1999 , 15 (2) : 182
〔3〕张革进, 陈晨. 介绍一种简便快捷的髓鞘染色法. 临
床与实验病理学杂志, 2000 , 16 (2) : 165
〔4〕田玉旺, 邢惠清, 丁华野, 等. 橙黄G染色法在显示
髓鞘中的应用. 诊断病理学杂志, 2000 , 7 (1) : 72
〔5〕田玉旺, 丁华野, 冷咏梅, 等. 水溶性猩红—亮绿双
重染色法在显示神经髓鞘中的应用. 中华病理学杂志,
2000 , 29 (4) : 310
〔6〕田玉旺, 丁华野, 李琳, 等. 介绍一种神经髓鞘染色
法, 临床与实验病理学杂志, 2003 , 19 (4) : 436

文章转载于《中国组织化学与细胞化学杂志》　2004 年12 月

作者: 九日 时间: 2013-3-10 12:26

阅读文章内容，记住文章结构，总结自己的工作经验，撰写技术文章！

作者: histotechnology 时间: 2013-3-13 08:09 标题: 回复 1# 的帖子

其实方法很多，只是自己不一定能做的出来。

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