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标题: 脱水和透明 [打印本页]

作者: DINGWEI    时间: 2002-1-5 16:41     标题: 脱水和透明


   所谓脱水就是利用脱水剂将组织内的水分置换出来,以利于有机溶剂的渗入,这一过程称为脱水。脱水是否彻底,直接关系到组织是否能充分透明,而脱水过度(原因是组织在纯酒精内时间过久,发生组织质地发生变化)容易造成组织发脆。造成组织发脆的原因还有加温(温度超过36℃)、脱水剂内加有丙酮、浸蜡用的石蜡中二甲苯过多等等。一般我们总认为组织发脆跟高浓度酒精有关,而忽视了与低浓度的酒精关系,其实低浓度的酒精具有强大的穿透力,比纯酒精更容易渗透到组织块内部使之脱水,组织如果在低浓度酒精里充分脱水,在高浓度酒精里只需脱去从低浓度到高浓度之间的水份,因此,仅需短时间就可完成,如果这时不缩短纯酒精的时间,便会引起组织发脆;如果脱水时加温,使用丙酮,还可引起组织收缩,并影响免疫组织化学的标记。为了使石蜡浸入到组织块内,必须经过一种既能与脱水剂混合,又能与石蜡相溶的媒介物质,这个过程称透明。目前最好的透明剂是二甲苯。很多人认为二甲苯极容易使组织发脆,这个观点很片面,在常温下,如果不是时间过长(超过24小时以上)二甲苯并不会引起组织过份发脆,相反会使某些组织结构比较质韧的组织:比如子宫肌瘤等相当好切),但是当二甲苯温度超过40℃以后,极易引起组织发脆。所以本人认为,大小标本最好分开脱水,一般情况下,大标本脱水时间(室温18℃)以80%酒精2小时、95%酒精(2道)各1个小时至1个半小时、纯酒精(3道)各1个小时,二甲苯(2道)各20~30分钟为宜;小标本脱水时间应相应缩短。脱水时间长短,与室温高低有密切的相关。我们在实践中发现,室温在12~15℃时,可作为一个临界温度范围。当室温高于此温度范围时,组织容易脱水,可适当缩短脱水时间;而室温低于该温度范围时,应适当延长脱水时间(如能保证在一个恒定的温度下最佳)。更换试剂,应以量为基础,定量更换,不能等到切片不好时再去更换。否则,至少会有2~3批组织切片不好。根据我科经验,如试剂用量为500ml,每500个蜡块更换一次为宜。

作者: 朱峰    时间: 2010-2-26 11:00

学习!
作者: 一只苹果    时间: 2010-11-5 21:50

头脑长知识了........
作者: Toni2008    时间: 2010-12-2 15:56

学习了 ,
作者: xiaoniou777    时间: 2010-12-2 21:28

请问丁老师,如果大标本和小标本放到一起用全自动脱水机,用上述方法脱水小组织会发脆吗?
作者: dingwei    时间: 2010-12-3 09:10

大多数小标本与大标本一起脱水都不会发脆,只有极少数会发脆,而极那少数病例到底是本身分开脱水也会不会发脆,不清楚,因为我们在小标本脱水程序中也会发现极少数组织发脆,发脆的具体原因我们并没有完全搞清楚。
作者: xiaoniou777    时间: 2010-12-3 22:02

哦,看来得找找原因,可能跟固定什么的都有关吧,谢谢丁老师。
作者: idea    时间: 2010-12-8 12:53

学习了
作者: 老笨猫    时间: 2010-12-9 21:17

自动脱水机的温度设多少比较合适?
作者: 黄树叶    时间: 2010-12-10 14:56     标题: 回复 6# 的帖子

组织发不发脆  本人觉得不能以脱水剂及其时间长短来衡量   也应该考虑组织本身的性质 (如甲状腺组织,它的粘液比较丰富,脱水干净之后就剩下粘液—胶质,那时候的胶质就像干涸的胶水一样是发硬、发脆的)  当然,温度过高或者脱水过狠了组织也会固缩、发硬,就是我们经常在新换液体之后的第一次或第二次制片遇到的问题了。                 
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