标题:
脑组织免疫组化求助
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作者:
gutou
时间:
2014-1-6 11:52
标题:
脑组织免疫组化求助
常规脱蜡至水,柠檬酸ph6.0微波修复高火7分钟 低火7分钟,一抗博奥森浓度1比100 ,4度过夜,37度复温1小时。二抗北京中衫37度17分钟(15分钟未见阳性),三抗37度15分钟。DAB北京中衫显色5分钟。
片子上会出现很多片状假阳性斑点,求教是为什么!如何解决。谢谢! 每步骤后面都有pbs洗3次。
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本帖最后由 gutou 于 2014-1-6 12:01 编辑
]
作者:
willfirm
时间:
2014-1-6 12:28
标题:
做的什么指标?克隆号?
一抗孵育时间一般不需要那么长,37摄氏度40min。一抗稀释度也需要多次摸索。
二抗,孵育时间,15和17min的差别不可能这么明显,看是不是操作过程的问题,比如一抗干片?上抗体之前玻片不要甩太干了。在pbs中加入0.05%tween20,用阻水笔把组织圈起来。
这张片子采图很模糊,最好重新采。
作者:
gutou
时间:
2014-1-6 16:00
谢谢,我再试试,请问还有其他可能没有呢?! 我们怀疑和固定是否有关系,组织固定采用了灌注固定法!
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本帖最后由 gutou 于 2014-1-6 16:01 编辑
]
作者:
willfirm
时间:
2014-1-7 12:23
标题:
回复 3# 的帖子
你做的动物模型?
如果是,那就要看你的抗体选择是否正确
作者:
chenbing
时间:
2014-1-8 00:57
看这架势应该是全片非特异的斑块样着色,先去好好检查检查抗体选对没,博奥深的一般是多克隆干粉,还是需要花点经历摸条件的。
作者:
gutou
时间:
2014-1-8 18:51
灌注固定30分钟后没有再次固定,也没有冲洗,直接冰箱里4度沉糖,是否是原因呢?
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本帖最后由 gutou 于 2014-1-8 18:53 编辑
]
作者:
willfirm
时间:
2014-1-8 19:40
标题:
回复 6# 的帖子
30分钟,太短了。。至少六小时。
作者:
yizhonghk
时间:
2015-6-24 10:15
学习了
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