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标题: 请问丁老师，关于ki-67的问题，求教 [打印本页]

作者: starry 时间: 2015-11-25 20:11 标题: 请问丁老师，关于ki-67的问题，求教

最近连续几天用手工做免疫组化，做的几批项目中总是有1-2个ki-67呈假阴性，之后加对照重新做，结果为阳性，可是总是出现第一次做不出来的情况，每次都有几张要重做，用机器做，ki-67每次都呈阳性，并且效果很好，实在找不到手工做不出的原因，求教！！！以下是我手工的步骤
1、烤片 80°C 1小时
2、水化过两缸二甲苯两缸100%酒精
3、柠檬酸修复高压锅，水开后放片子，出气后计时3min ，停止，冷水降温。
4、冲洗
5、双氧水修复6min
6、冲洗
7、加一抗，一个半小时，37°C
8、冲洗
9、加二抗，半小时，37°C
10、冲洗
11、DAB显色
试剂盒，抗体，显色液用的福州迈新的，之前没出问题，就是最近做不出来了，求教！

作者: jensen0901 时间: 2015-11-25 21:22

迈新的Ki-67，试试EDTA9高压修复看看。

作者: dingwei 时间: 2015-11-27 09:12

修复后冷水降温，片子从多少度的缓冲液里拿出来洗？

作者: starry 时间: 2015-11-27 19:56 标题: 回复 3# 的帖子

冷水是自来水，给高压锅降温，降到室温的，锅里的缓冲液大约20°C。

[ 本帖最后由 starry 于 2015-11-27 20:03 编辑 ]

作者: starry 时间: 2015-11-27 20:01 标题: 回复 2# 的帖子

今天试了EDTA ph9 还是出现之前的结果，这次做了9个ki-67，有一个乳腺低分化癌的呈阴性，其他的多少都有阳性，还有一个泛染了。

作者: zxjyongyan 时间: 2015-12-1 09:33

我一直认为这是ki67不稳定造成的，国产试剂经常出现这种情况。我们医院最近ki67，er，pr也是这样，经常会出现1,2个阴性，重做后又阳。。。

作者: dingwei 时间: 2015-12-1 15:29

感觉不是，你还得找原因，如果试剂有问题，第二次不应该能做出来，你是隔水煮还是直接把缓冲液放高压锅内煮？

作者: lijiahua 时间: 2015-12-22 16:39

这种情况经常出现，手工做结果不稳定，说明在操作过程中出现失误，

作者: ly97105 时间: 2015-12-30 08:19 标题: 回复 1# 的帖子

我们科里有两台免疫组化机，平时也做手工免疫组化，但是流程跟你的稍有区别，我们手工做出来的没出现过你这种情况。
1、烤片 70°C 1小时
2、三缸二甲苯，100%酒精，95%，90%，80%至水洗。
3、柠檬酸修复高压锅，水开后放片子，出气后计时1分20秒，停止，冷水降温（中间换2-3次降温的凉水），一定要等柠檬酸修复液凉了才可以。
4、PBS冲洗5分钟两遍。
5、双氧水修复12min
6、PBS冲洗5分钟两遍
7、加一抗，一个小时（室温大于23度）
8、PBS冲洗5分钟两遍
9、加二抗，半小时
10、PBS冲洗5分钟两遍
11、DAB显色

这是我们的手工免疫组化的步骤，希望能帮到你。

作者: 小飞侠2010 时间: 2016-7-21 13:40

每次都做阳性对照了？

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