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标题: 免疫组化三步法背景深 [打印本页]

作者: guoshan 时间: 2016-4-7 21:01 标题: 免疫组化三步法背景深

我们免疫组化用的是三步法，背景总是有点深，用的SP试剂盒。我们的步骤是下面，望各位老师给看看有没问题。 1 ）、石蜡切片70度烤箱1个小时脱蜡至水。PBS 浸泡 5 分钟。
（ 2）高压热修复，切片放入高压锅，气阀喷气后3分钟，把锅放入冷水中直到冷却
（ 3 ）、
PBS 冲洗， 3分钟 x3 次。 3%H 2 O 2 室温孵育10 分钟。
（ 4 ）、 5-10% 正常山羊血清（ PBS 稀释）封闭，室温孵育 15分钟，倾去血清，勿洗。滴加一抗工作液，室温孵育30分钟后 4 ℃ 过夜。
（ 5 ）、切片冰箱取出后室温放置30分钟， PBS 冲洗， 3 分钟 x3 次。
（ 6 ）、滴加适量生物素标记二抗工作液，室温孵育 15 分钟。
（ 7 ）、 PBS 冲洗， 3 分钟 x3 次。
（ 8 ）、滴加适量的辣根酶或碱性磷酸酶标记的链霉卵白素工作液，室温孵育 15分钟。
（ 9 ）、 PBS 冲洗， 3 分钟 x3 次。
（ 10 ）、DAB显色剂显色 2 分钟
（ 11 ）、自来水充分冲洗，复染，脱水，透明，封片
是不是第2步修复的不对，我看丁老师书上说水开后放入切片，我们是直接放入然后加热，水开后计时。

作者: guoshan 时间: 2016-4-11 09:31 标题: 请大家指教

请大家指教

作者: guoshan 时间: 2016-4-13 08:48 标题: 有人吗

有人吗

作者: guoshan 时间: 2016-4-13 08:50 标题: 哪位给解决一下

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