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标题: AgNOR染色法 [打印本页]

作者: dingwei 时间: 2002-1-18 22:30 标题: AgNOR染色法

                                 AgNOR染色法
试剂配制：
（1） AgNOR染色液：
甲液：明胶2 g 溶于双蒸水至99 ml，在60℃使之完全溶解，再加入纯甲酸1 ml 摇匀待用。
            乙液：硝酸银50 g 溶解于双蒸水中至100 ml，4℃冰箱保存。
（2） AgNOR 工作液
取甲液10 ml，乙液20 ml 临用前混合。
步骤：
1、切片脱蜡至水
2、双蒸水洗2次
3、AgNOR 工作液中（25℃）浸染30分钟（暗处进行）（镜下观察）
4、双蒸水洗3次
5、脱水,透明,封固
结果：油镜观察，细胞核及胞质背景为淡黄色， AgNOR呈棕黑色颗粒状。

作者: ylzhao 时间: 2004-11-30 20:19 标题: AgNOR染色法

Ag-Nor染色法
核仁组成相关嗜银蛋白（Nucleolar organizer region assoiated argyrophil protein, Ag-Nor）染色技术，核仁组成区位于细胞核核仁中的DNA环上，因为含有rRNA基因因而与核仁形成有关。其主要功能是转录rRNA合成蛋白质。籍银离子具有与rRNA相关酸性非组蛋白特异性结合的特点，使核仁组成区得以显示，这也说明Ag-Nor与rRNA基因的活性有关，因而籍Ag-Nor技术对肿瘤研究有意义。在肿瘤发展过程中，良性性肿瘤与恶性肿瘤的细胞核及核仁结构和功能都会出现不同的变化，这种变化有助于区分良性、恶性肿瘤及癌前病变。本文介绍Ag-Nor染色技术用于宫颈刮片和尿液标本涂片的检测。
取材与固定
宫颈刮片、尿液离心涂片用95%乙醇或10%福尔马林固定15-30min。
染色步骤
1 宫颈刮片（涂片）蒸馏水充分洗3-4次。
2 浸入酸化液（36%冰醋酸1份无水乙醇3份）5-7 min。
3 蒸馏水洗3-4次。
4 胶银液（A液：明胶2g溶于1%甲酸水溶液 B液：50%硝酸银液过滤使用前A液1份B液2份混均后使用）20℃ 20-30min。
5 5%硫代硫酸钠水溶液1-2min。
6 蒸馏水洗3-4次。
7 乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固
结果观察组织背景呈淡黄色，高倍镜镜检胞浆不着色。Ag-NOR位于细胞核及核仁的阳性颗粒呈棕黑色。选择无重叠、清晰的区域，随机选取50-100个细胞用油镜观察并计数Ag-NOR颗粒的数量。根据每例中的Ag-NOR颗粒总数，再换算为每个细胞核中所含该颗粒的平均数。根据数量，形态，大小及染色的深、浅等变化判断病变程度。
一般正常细胞中Ag-NOR颗粒平均数为1%-2%颗粒细小、均匀，染色适中。恶性肿瘤细胞核及核仁中的Ag-NOR颗粒平均数达4%以上，且颗粒粗大浓染并密集成块状。交界性病变（癌前期病变）平均数为2.5%-4%±。颗粒比正常细胞的稍大，数量增多，呈圆形或卵园形，染色较深。Ag-NOR颗粒的数量，大小和形态变化随病变程加重而改变。数量和大小呈正比。

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