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标题: 求助,急急急!!! [打印本页]

作者: 小聂    时间: 2003-2-18 09:39     标题: 求助,急急急!!!

老师您好,请问原位杂交4%多聚甲醛(用于前固定)用缓冲液PBS的好还是用蒸馏水配好?应该如何配制比较好?固定多长时间? :em14:
作者: 冰雪    时间: 2003-2-18 21:55     标题: 求助,急急急!!!

应该用PBS缓冲液来配制4%多聚甲醛作为固定液。
取市售DEPC1ml,加入1L待处理水(双蒸水或去离子水),经猛烈振摇后,充分溶解,于室温静止数小时,然后高压灭菌(15磅20分钟)。以除去DEPC(DEPC分解为CO2和乙醇)。
4%多聚甲醛配方:
多聚甲醛40g、DEPC水500ml、2*PBS 500ml
配法:称取40g多聚甲醛溶于装有500mlDEPC水的玻璃容器中,持续加热磁力搅拌至60-65度,使成乳白色悬液。用1.0mol/L的NaOH调PH至7.0,使呈清亮状,再加入约500ml 2*PBS,充分混匀,可在检测一下PH值,过滤后定容至1000ml,室温或4度保存备用。
固定:通常组织块固定4-12小时以内,过度延长固定时间会引起细胞内生物大分子的过度交联,影响探针的穿透力,降低杂交效率。
提供的方法不知对你是否有帮助
作者: 小聂    时间: 2003-3-2 19:32     标题: 求助,急急急!!!

对我很有帮助,谢谢!!!
不过我想问一下,PH值一定为7吗?PH值对实验有很大的影响吗?请您指导。

作者: shanghainese    时间: 2005-6-26 00:29     标题: 求助,急急急!!!

[这个贴子最后由shanghainese在 2005/06/26 04:29am 编辑]

2*PBS我想因该是2倍浓度的PBS(2X PBS).
作者: 闲云    时间: 2005-6-27 15:24     标题: 求助,急急急!!!

原位杂交没你们说的那么小心,随便整还是问题不大,只要带好手套,不要吐口水影响不大,DEPC致癌呦,小心点!




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