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标题: about immunocytochemistry [打印本页]

作者: Ned 时间: 2003-4-11 22:13 标题: about immunocytochemistry

请问哪位可提供免疫细胞化学的protocol，谢谢。

作者: caiyangcy 时间: 2003-5-17 15:19 标题: about immunocytochemistry

1、玻片脱蜡至水
2、阻断内源性过氧化物酶(198毫升甲醇或水+2毫升30% H2O2)室
温20分钟。
3、pH7.2缓冲液洗三次。
4、胰蛋白酶消化37 ℃，30分钟。（或按说明书要求：放入抗原修复液内微波修复20分钟、或电炉加热30分钟、或高压锅加帽出气后3分钟，快速冷却；或不处理）
6、滴加正常血清37 ℃，30分钟。（可不用）
7、擦去多余血清，加第一种一抗37 ℃，30分钟。
8、pH7.2缓冲液洗三次。
9、滴加生物素化二抗，37 ℃，30分钟。
10、pH7.2缓冲液洗三次。
11、滴加ABC或S-P复合物，37 ℃，45分钟。
12、pH7.2缓冲液洗三次。
13、棕色DAB显色3～10分钟。
14、pH7.2缓冲液洗三次。
15、滴加正常血清37 ℃，30分钟。（可不用）
16、擦去多余血清，加第二种一抗37 ℃，30分钟。
17、pH7.2缓冲液洗三次。
18、滴加生物素化二抗，37 ℃，30分钟。
19、pH7.2缓冲液洗三次。
20、滴加ABC或S-P复合物，37 ℃，30分钟。
21、紫蓝色DAB显色
22、水洗
23、核固红复染，脱水，透明，封固。
双重染色法
1、切片脱蜡至水
2、阻断内源性过氧化物酶(198毫升甲醇或水+2毫升30% H2O2)室温20分钟。
3、pH7.2缓冲液洗三次。
4、胰蛋白酶消化37 ℃，30分钟。（或按说明书要求：放入抗原修复液内微波修复20分钟、或电炉加热30分钟、或高压锅加帽出气后3分钟，快速冷却；或不处理）
6、滴加正常血清37 ℃，30分钟。（可不用）
7、擦去多余血清，加一抗37 ℃，30分钟。
8、pH7.2缓冲液洗三次。
9、滴加生物素化二抗，37 ℃，30分钟。
10、pH7.2缓冲液洗三次。
11、滴加ABC或S-P复合物（辣根过氧化物酶），37 ℃，45分钟。
12、pH7.2缓冲液洗三次。
13、DAB（棕色）或AEC（红色）显色3～10分钟。
14、pH7.2缓冲液洗三次。
15、双标阻断液，10分钟（可不用）
16、滴加正常血清37 ℃，30分钟。（可不用）
17、擦去多余血清，加第二种一抗37 ℃，30分钟。
18、pH7.2缓冲液洗三次。
19、滴加生物素化二抗，37 ℃，30分钟。
20、pH7.2缓冲液洗三次。
21、滴加碱性磷酸酶复合物，37 ℃，30分钟。
22、pH7.2缓冲液洗三次。
23、BCIP/NBT显色（蓝色）
24、水洗
25、甲基绿复染，脱水，透明，封固。
如果选择辣根过氧化物酶可选择DAB（棕色）显色，在第21步用辣根过氧化物酶复合物，第23步用AEC（红色）显色，但要注意的是AEC不能长期保存。如选择另一个为碱性磷酸酶可选用BCI/NBT、AP-Red、AP-Orange，用BCI/NBT显色最好。
（1）伊红（水溶性）
配方：
伊红（水溶性） 2.5-5 g
蒸馏水 500 ml
将水溶性伊红溶于蒸馏水中，然后加浓盐酸10毫升，充分搅拌，静置过夜后过滤。过滤后的沉淀用蒸馏水冲洗二次，再过滤；将沉淀物连同滤纸一起放入温箱内干燥，加95%酒精1000毫升，配成饱和液。使用前再用95%的酒精 1:1～2倍稀释，加入1～2%冰醋酸。
此方法具有染色时间快，颜色鲜艳，不容易褪色，使用寿命长等特点。
（2）伊红（醇溶性）
配方：
伊红（醇溶性） 2.5-5g
75%酒精 1000 ml
加几滴冰醋酸至半透明状。

作者: shanghainese 时间: 2003-5-22 06:46 标题: about immunocytochemistry

I have some protocol of immunocytochemistry, but you have to make slides first. What kind cells are you going to use (Adhesive or suspension cells)? Do you have adhesive slides, cytospin machine or chamber slides?

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