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标题: 出现假阴性的原因 [打印本页]

作者: DINGWEI    时间: 2002-1-12 22:42     标题: 出现假阴性的原因


1.固定时间过长,浸蜡、烤片温度过高,导致抗原丢失,无法补救。
2.固定液不合适,或浓度不对,导致固定不佳。最好使用10%中性福尔马林。
3.第一抗体没加。补救办法:染过的片子用缓冲液洗干净后,再加一抗,按步骤重新染过。
4.第一抗体加错。如加错的抗体和你要加的抗体是不同类型的二抗,那原片子用缓冲液洗干净后,再加一抗,可能还能补救。
5.二抗没加,或二抗加错。补救办法:染过的片子用缓冲液洗干净后,再加二抗,关系不大。
6.DAB显色剂里双氧水没加,现象是全部不着色,加双氧水后再显色。
7.抗体浓度过低。补救办法:增加抗体浓度,染过的片子用缓冲液洗干净后,加一抗再染。
8.孵育的时间太短,没按要求时间孵育,从一抗开始重新染过。
9.孵育温度太低。解决办法:保证温箱温度在37℃,或增加孵育时间,如一抗4℃过夜。
10.抗体本身的特异性。有的抗体在正常组织中表达很强,而肿瘤时表达很弱,或不表达。
11.消化方法有误,或处理时间不正确。像微波处理时间不够或温度不正确。
12.缓冲液pH值不正确。





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