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标题: 出现假阴性的原因 [打印本页]

作者: DINGWEI 时间: 2002-1-12 22:42 标题: 出现假阴性的原因

1．固定时间过长，浸蜡、烤片温度过高，导致抗原丢失，无法补救。
2．固定液不合适，或浓度不对，导致固定不佳。最好使用10%中性福尔马林。
3．第一抗体没加。补救办法：染过的片子用缓冲液洗干净后，再加一抗，按步骤重新染过。
4．第一抗体加错。如加错的抗体和你要加的抗体是不同类型的二抗，那原片子用缓冲液洗干净后，再加一抗，可能还能补救。
5．二抗没加，或二抗加错。补救办法：染过的片子用缓冲液洗干净后，再加二抗，关系不大。
6．DAB显色剂里双氧水没加，现象是全部不着色，加双氧水后再显色。
7．抗体浓度过低。补救办法：增加抗体浓度，染过的片子用缓冲液洗干净后，加一抗再染。
8．孵育的时间太短，没按要求时间孵育，从一抗开始重新染过。
9．孵育温度太低。解决办法：保证温箱温度在37℃，或增加孵育时间，如一抗4℃过夜。
10.抗体本身的特异性。有的抗体在正常组织中表达很强，而肿瘤时表达很弱，或不表达。
11.消化方法有误，或处理时间不正确。像微波处理时间不够或温度不正确。
12.缓冲液pH值不正确。

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