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标题: [转帖]再问有关一抗稀释的问题？ [打印本页]

作者: 好好 时间: 2003-5-19 15:18 标题: [转帖]再问有关一抗稀释的问题？

用于稀释一抗的PBS中加入Triton-100，请问各位前辈Triton-100的浓度是多少？是0.4%？0.3%？国产和进口是否有区别？

作者: 好好 时间: 2003-5-19 20:36 标题: [转帖]再问有关一抗稀释的问题？

对不起，我打错了，是Triton X-100。
盼丁老师等前辈给予解答！

作者: dingwei 时间: 2003-5-19 21:07 标题: [转帖]再问有关一抗稀释的问题？

你说的二种浓度都可以。

作者: shanghainese 时间: 2003-5-22 23:49 标题: [转帖]再问有关一抗稀释的问题？

好好 :
If you are doing brain IHC staining, I recommend you using 0.1% Saponin. It is much better than 0.2% Triton X-100 and less background. It is not necessary adding these kind detergents with primary antibody. You can incubate brain section with them before add primary antibody.

作者: 好好 时间: 2003-5-25 16:12 标题: [转帖]再问有关一抗稀释的问题？

丁老师、shanghainese 老师好：
我在做脑缺血方面的课题，现在需要做脑片的免疫组化。用冰冻切片，对于一些细节问题我一直都弄不懂。受经济条件限制，我采用下步骤，请你们帮我看看，可行吗？
         （冰冻切片）-20C 丙酮固定20 min
               0.01 M PBS洗3次，5 min/次
                     3%H2O2甲醇，15 min
               0.01 M PBS洗3次，5 min/次
                           5%羊血清30 min
                        一抗，4C 过夜
            0.01 M PBS洗3次，5 min/次
                        二抗，37C 1小时
            0.01 M PBS洗3次，5 min/次
            DAB显色（显微镜下控制显色时间）
         视情况决定是否苏木精衬染，分化，蓝化
                        脱水，透明，封片
一抗、二抗均用PBS稀释，结果有个通病，背景色太深，加入Triton X-100好象没有太大效果。该如何处理，是否稀释一抗的PBS中加入1%皂甙会消除，是否有其他办法？

作者: dingwei 时间: 2003-5-25 20:46 标题: [转帖]再问有关一抗稀释的问题？

关键是用的是什么抗体，有的一抗（特别是科研用的）背景很黄，一点也没办法。

作者: shanghainese 时间: 2003-5-25 22:20 标题: [转帖]再问有关一抗稀释的问题？

好好：你好！
我不知你用的是什么抗体，什么克隆，从什么地方买的，很难给你好的建议。不过你可试下稀疏一抗不同的浓度。
另外我不明白你用了丙酮固定，为何还用 Triton X-100？不妨试试不用 Triton X-100 。

作者: 好好 时间: 2003-5-26 21:53 标题: [转帖]再问有关一抗稀释的问题？

丁老师、shanghainese 老师好：
我的课题主要是做5-脂氧酶（5-LO）的表达,不知你们可知道或做过？抗体定出很长时间，可还没到货。
这期间，我做过NR1、VEGF、GFAP。NR1是自己实验室生产的，表达较多。VEGF是北京中山提供的Santa Cruz产品，在脑片上我一直做不出来，试过不少方法，不知道原因在哪儿？GFAP也是北京中山的，是多抗（便宜些），有表达，但不如别人（主要是老外）文献上的好看。是否用单抗会好些？
对于你们的帮助，深表感谢！

作者: 高山流云 时间: 2003-7-26 09:18 标题: [转帖]再问有关一抗稀释的问题？

背景染色深应考虑一抗的稀释度的问题,可多试几个浓度. 用了丙酮就不要用TritonX-100了,它们都有细胞膜打孔的作用.

作者: 好好 时间: 2003-8-1 20:59 标题: [转帖]再问有关一抗稀释的问题？

谢谢！
我一直以为丙酮是起后固定的作用，不知其有与TritonX-100同样的作用。我试一下降低一抗的浓度。

作者: pathypmh 时间: 2003-8-6 20:59 标题: [转帖]再问有关一抗稀释的问题？

稀释试剂的缓冲液不要加TritonX-100，那个只是做洗涤用，比如还有加土温的等。
脑的免疫组画，建议用浓甲酸处理组织切片2小时后，再进行以后的操作

作者: 好好 时间: 2003-8-6 21:30 标题: [转帖]再问有关一抗稀释的问题？

楼上好！
  我有些糊涂了。
  我认为是应该在稀释抗体的缓冲液中加TritonX-100。我做的是冰冻切片，您所说的“浓甲酸处理组织切片2小时”是否适用？我真没听说过。
  希望各位大师给予指点迷津！

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