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标题: [求助]各位老师帮帮我！ [打印本页]
作者: 好好    时间: 2003-5-30 09:11     标题: [求助]各位老师帮帮我！

我做小鼠脑片的胶质细胞的表达。GFAP是北京中山的，是多抗（便宜些），有表达，但不如别人（主要是老外）文献上的好看。是否用单抗会好些？
作者: shanghainese    时间: 2003-5-30 23:32     标题: [求助]各位老师帮帮我！

好好,
I don't recommend you using purified mouse anti mouse monoclonal antibody doing IHC.
作者: dingwei    时间: 2003-6-1 03:26     标题: [求助]各位老师帮帮我！

楼上的朋友你能不能用中国的国语写，我想你写的目的是给中国人看的，大多数技术员是看不懂洋文的。
作者: shanghainese    时间: 2003-6-1 06:25     标题: [求助]各位老师帮帮我！

丁 先 生 ， 当 然 可 以。
好 好 ：
有 一 些 小 鼠 抗 小 鼠 GFAP 的 单 抗。
但 我 不 赞 成 你 用 纯 化 的 小 鼠 抗 小 鼠 的 单 抗，在 小 鼠 组 织 上 做 IHC。除 非 你 有 HRP 或 AKP 标 记 的 小 鼠 抗 小 鼠 的 单 抗。
作者: dingwei    时间: 2003-6-1 20:16     标题: [求助]各位老师帮帮我！

赞同！！！
作者: 好好    时间: 2003-6-2 18:30     标题: [求助]各位老师帮帮我！

谢谢两位老师的解答，我这两天一直为买哪种抗体烦恼。现在我决定继续用中山的多抗。胶质细胞的表达不多，可能是脑缺血时间还不够长，我是做脑缺血的，24小时取脑切片的。可能48、72小时表达会多些吧？
作者: wdoggy    时间: 2003-7-10 10:31     标题: [求助]各位老师帮帮我！

我做脊髓损伤7D后取组织星形很多
作者: 好好    时间: 2003-7-11 16:44     标题: [求助]各位老师帮帮我！

楼上好！
  我想我的片子表达不多，主要是因为时间不够长，我是脑缺血24-48小时的，估计要一周以上胶质细胞的表达会明显增多。
作者: 好好    时间: 2003-7-11 16:47     标题: [求助]各位老师帮帮我！

我还有个问题，胶质细胞的片子应该是多厚的，8微米？20微米？
望各位老师给予解答！
作者: shanghainese    时间: 2003-7-11 22:50     标题: [求助]各位老师帮帮我！

胶质细胞比较小，5到8微米应该没问题。游离的冰冻切片为20微米以上，但镜下不如8微米好。
作者: 好好    时间: 2003-7-12 21:24     标题: [求助]各位老师帮帮我！

shanghainese老师好！
  你所指的游离的冰冻切片是否指未经灌流固定过的新鲜冰冻切片？
  我开始时是做8微米的新冰冻切片（未经灌流等），后来看到有些文献上是20微米的，所以又做了20的（经过灌流、固定、脱水）了。可是发现片子不如8微米的好看，而且用苏木素复染后，分化时间又不对了，我实在有些弄不懂了？？？是厚度的原因？还是固定脱水的影响？
  望答复！
作者: shanghainese    时间: 2003-7-13 12:15     标题: [求助]各位老师帮帮我！

游离的冰冻切片在神经研究领域是指经灌注固定后的冰冻切片，这种切片通常为大鼠
或小鼠的脑组织，厚度在20至40微米，切好后的片子放在PBS里待用。这种切片的制
作比较麻烦特别是灌注，切片和染色，它们的步骤与一般冰冻切片不同而且不用任
何复染。整个染色过程中，切片始终处於游离状态。染完后才将切片裱在载玻片上。
您要想达到文献上的效果还是按文献步骤去做。另外您应该请个专家指导您的实验，
用同一种抗体用在不同的切片上，效果可能不一样。
作者: 好好    时间: 2003-7-14 17:40     标题: [求助]各位老师帮帮我！

shanghainese  老师好！
  您给我上了很好的一课，我的导师学生太多，所做的课题涉及领域太广了，在病理技术方面他无法指导我，我一直是自己摸索加到处请教。
  就您的指导，我得出2条结论：1、20-40微米的脑片应该做漂片（游离的冰冻切片），最好请个专家指导。2、5-8微米的脑片可以做贴片（直接裱在载玻片上），可按常规染色。
  是吗？
作者: shanghainese    时间: 2003-7-14 22:28     标题: [求助]各位老师帮帮我！

对。
您应做出决定选择何种切片，以便将来总结结果写文章。
您还要明确了解您所用的抗体可以做组化。有些抗体虽然厂商说可用组化，但实际并非如此特别是二道贩子卖的东西(有的抗体特异性不对，有的Background很高)。
作者: 好好    时间: 2003-7-15 20:14     标题: [求助]各位老师帮帮我！

谢谢您的指导！谢谢！



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