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标题: 请丁老师指点 [打印本页]

作者: 黄河 时间: 2003-7-18 21:55 标题: 请丁老师指点

请丁老师指点
丁老师你好,我是一名在读研究生,做的课题是涎腺的腺样囊性癌,检测指标为P27,一抗为Zymed公司产品，SP试剂盒是Zymed的通用型试剂盒，DAB显色试剂盒也是Zymed的产品，不过我同学比我早一个礼拜买的是ABC三种试剂用前配，我买的DAB却是AB两种试剂用前配制，产品编号一致，我的说明书上也说是只有A和B俩样试剂，1毫升双蒸水加各一滴。参考多数有关p27的文献一抗浓度定为1：50，一抗4度过夜，2，3抗室温半个小时。DAB显色，苏木素复染，中性树胶封片。现在出现的问题是：
1：加上DAB显色时，放到显微镜下马上就普遍出现棕黄色，整个视野都是，而看文献P27一般是细胞核着色，部分细胞浆也有着色，我做的片子细胞核着色要吗就很不明显，要吗就是所有的细胞核都是着色，根本看不到蓝染的细胞核。
2：用PBS代替一抗做的阴性对照的背景上也有淡淡的黄色。
3：看资料说腺上皮来源的组织和肿瘤中内源性生物素呈强阳性表达，就你的经验来看，涎腺组织做免疫组化是不是需要阻断内源性生物素呢？？？有文章介绍说用蛋清来进行阻断内源性生物素，不知道是否可行？？？？
恳请给予指导！！！！！！！！

作者: dingwei 时间: 2003-7-19 07:01 标题: 请丁老师指点

1、Zymed公司的产品质量不稳定。（建议买DAKO）
2、SP试剂盒背景本来就黄。（建议买二步法试剂盒）
3、与内源性生物素无关。
4、DAB没问题。

作者: 黄河 时间: 2003-7-19 15:13 标题: 请丁老师指点

非常感谢丁老师的指点!!!!
幸亏我还有两个指标的试剂没买呢,原计划也是买Zymed公司的现在看来是要改了.
另外再请教一个问题:
ki-67是在出现了MIB1克隆系以后才可以应用于石蜡切片的免疫组化,在这个克隆系以后是不是出现了其他的克隆系也可以用与免疫组化的???????
福建迈新的是MIB1,而ZYMED的是ki-s35.
Santa crus和迈新的产品质量如何呢????

作者: dingwei 时间: 2003-7-19 16:20 标题: 请丁老师指点

ki-67的其他克隆系能否应用于石蜡切片的免疫组化，说明书上会说明白。Santa crus的试剂比较新，他有其他公司没有，搞科研很多还是要靠他，但质量比Zymed公司还要不稳定。迈新的产品质量大多还可以，每家公司都有他的特点，不会是所有的试剂都好，也不会是所有的试剂都不好。

作者: 黄河 时间: 2003-7-19 21:45 标题: 请丁老师指点

那么我请问P27,ki-67,cyclinE 这几个指标
就丁老师你了解的情况看来
哪个公司的产品好点呢?????
DAKO公司的产品我所在的城市好象没有代理.

作者: dingwei 时间: 2003-7-21 21:07 标题: 请丁老师指点

P27,ki-67，DAKO好，cyclinE 那家好不是很清楚

作者: shanghainese 时间: 2003-7-21 22:39 标题: 请丁老师指点

抗ki-67的抗体有好几个克隆系(clone name)分别由不同的公司出售，有的很好有的很差甚至连特异性都不对。在做ki-67时，最好用一张淋巴组织切片例如淋巴结或扁桃体做阳性对照片。在淋巴组织里，ki-67主要分布在生发中心。MIB1是一个很好的克隆系，能用在antigen retrieval之后的石蜡切片上。另外BD有一个更好的克隆B56，这个抗体不仅和MIB1一样可用于冰冻和石蜡切片,而且可与人，大鼠，小鼠和猪等种属的ki-67抗原反应。B56除了免疫组化外，还可用于流式， Western等。

作者: 黄河 时间: 2003-7-22 17:18 标题: 请丁老师指点

非常感谢楼上两位老师的指点!!!!!

作者: dingwei 时间: 2003-7-22 21:25 标题: 请丁老师指点

引用:

下面引用由shanghainese在 2003/07/21 10:39pm 发表的内容：
抗ki-67的抗体有好几个克隆系(clone name)分别由不同的公司出售，有的很好有的很差甚至连特异性都不对。在做ki-67时，最好用一张淋巴组织切片例如淋巴结或扁桃体做阳性对照片。在淋巴组织里，ki-67主要分布在生　...

这才是专家！！！

作者: shanghainese 时间: 2003-7-22 22:10 标题: 请丁老师指点

过奖了。

作者: 黄河 时间: 2003-7-22 23:49 标题: 请丁老师指点

你们都是专家!!!!!!
哎说句老实话
我就想做一名合格的临床医生
本人性格也比较适合外科
我是口腔外科的
现在却要做基础研究
从本科开始就对实验很没感觉
现在做实验加加试剂,提缸子脱脱水脱脱蜡,实在是搞不来
感觉简直在走上歧途一般
有这样的时间我去上上临床
对我将来的职业帮助还的大一些!!!!!!
感谢两位老师的指点
我按你们说的再做做
有问题还请你们多多指教!!!!!!!!!

作者: shanghainese 时间: 2003-7-23 00:34 标题: 请丁老师指点

临床医生应该做点科研以增加思路和才干，这也叫与国际接轨。

作者: 黄河 时间: 2003-7-23 23:34 标题: 请丁老师指点

再请教两位老师一个问题:
我做的指标都是核表达
我用的是苏木素衬染1分半
水洗
盐酸分化液1到2秒
水洗
会不会是因为苏木素把阳性染色的核给遮盖了???????
造成全是蓝染的细胞核.

作者: shanghainese 时间: 2003-7-23 23:59 标题: 请丁老师指点

如果您用DAB显色，套染苏木素不好把阳性染色的核给遮盖的。

作者: shanghainese 时间: 2003-7-24 04:31 标题: 请丁老师指点

如果您用DAB显色，套染苏木素不会把阳性染色的核给遮盖的。

作者: 黄河 时间: 2003-7-24 13:14 标题: 请丁老师指点

谢就一个字!!!!!!!!!!

作者: shanghainese 时间: 2003-7-24 22:01 标题: 请丁老师指点

不用解。

作者: 黄河 时间: 2003-7-24 23:49 标题: 请丁老师指点

还是要谢
谢完接着问:嘿嘿嘿嘿.............
两为老师
你们对一抗工作液怎么看????
我还有两个指标
准备定工作液
因为我用我同学的P27(迈新)工作液
做出了结果,病理科的老师说都能照相了.
麻烦您们了!
再谢谢!!!!!!!

作者: 黄河 时间: 2003-7-27 16:36 标题: 请丁老师指点

再请教:
丁老师,shanghainese 老师
我做的结果经病理副教授鉴定:
是细胞浆表达为主,有些细胞是浆核都表达
很少有着色很好的细胞核
当然也有,很少
我用的浓度是1:80
而且我用同学的迈新的工作液做的结果要比Zymed的结果要好
背景色要好
但是也是细胞浆为主
请丁老师指点指点!!!!!!!!!!!
谢谢!!!!!!!!!

作者: dingwei 时间: 2003-7-27 20:14 标题: 请丁老师指点

迈新的工作液是最好的，因为迈新采用了多家公司之长，选择了表达好的抗体，并不是某一厂家的代理。如果迈新有，大多数可以买。

作者: 黄河 时间: 2003-8-1 14:41 标题: 请丁老师指点

丁老师
我现在做的P27背景色很重
照相会不理想
可我已经把双氧水和血清阻断时间都延长到了40分钟
不知道为什么
请您指点指点！！

作者: dingwei 时间: 2003-8-5 20:26 标题: 请丁老师指点

还是二抗本身的问题。

作者: pathypmh 时间: 2003-8-6 20:37 标题: 请丁老师指点

主要还是试剂的问题
用失效的试剂做出的片子，就是那种德性的

作者: 黄河 时间: 2003-8-6 21:21 标题: 请丁老师指点

失效?????
才买的啊
不过我觉得也是试剂的问题

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