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标题: 请丁老师及各位前辈指点 [打印本页]

作者: 妙手仁心2008 时间: 2003-7-24 13:10 标题: 请丁老师及各位前辈指点

丁老师：
你好，不知您有没有做过肿瘤组织中P27表达变化方面的研究。我做的是肝癌组织中p27方面的研究，我买的是中山的一抗，说明书上写着p27为胞核着色，可我的试验结果却是肿瘤组织、癌旁组织、正常组织大多数细胞表现为胞浆着色不知这是什么原因？是我的染色有问题，还是哪一步没有处理好？或者与组织特异性有关。我查的文献上，虽然有报道胞浆着色的，但大多数细胞仍是以胞核着色为主。请丁老师及各位前辈指点迷津，多谢了！！！！
另外，我还想坐原位细胞凋亡检测，试剂盒是德国保灵曼的。不知有没有人做过这方面的研究，指导一下试验过程及注意的问题，谢谢！！！

作者: 临风揽月 时间: 2003-7-25 09:47 标题: 请丁老师及各位前辈指点

染色定位不准和组织固定、抗原修复、试剂等有关。一定要做阳性对照，可以排除影响原因。

作者: 妙手仁心2008 时间: 2003-7-25 13:05 标题: 请丁老师及各位前辈指点

我做了阳性对照，基本都是胞核着色。另外，用同一组织块切的片子，作PCNA检测（胞核表达）全部都定位在胞核中。不知下一步该怎么办？请多多指教啊，我现在很是彷徨。

作者: shanghainese 时间: 2003-7-25 22:28 标题: 请丁老师及各位前辈指点

您再看看您的阴性对照isotype control片是否有相同的染色。如果isotype control片很干净，您的染色是对的。至於如何分析结果，那要您和您老板的知识和智慧。

作者: dingwei 时间: 2003-7-26 11:35 标题: 请丁老师及各位前辈指点

P27我用DAKO的，原位细胞凋亡检测试剂盒我也是保灵曼的，关键要是正确控制蛋白酶K的消化程度，不要用时间控制（和切片的厚薄、组织类型、大小都有关系），用肉眼看，有一点半透明状效果最好。一次不要做多，否则掌握不好。

作者: 妙手仁心2008 时间: 2003-7-26 12:59 标题: 请丁老师及各位前辈指点

丁老师：
您做的p27是什么组织呢？结果是以胞核为主还是以胞浆为主？对于现在的结果真不知道如何是好，不知道您有没有好的建议，我实在不知道这是为什么？请您多多指教啊！

作者: dingwei 时间: 2003-7-26 22:01 标题: 请丁老师及各位前辈指点

人的肿瘤组织，以胞核为主。1：50，室温过夜。二抗希望你买上海长岛公司通用型的，我试过，做核抗原，这家公司的二抗最好。

作者: 黄河 时间: 2003-7-27 16:34 标题: 请丁老师及各位前辈指点

楼主的问题跟我一样:
我也是做P27,中山代理的Zymed的产品
做涎腺肿瘤
我做的结果经病理副教授鉴定:
也是细胞浆表达为主
很少有着色很好的细胞核
当然也有!!!!!!!
我用的浓度是1:80
而且我用同学的迈新的工作液做的结果要比Zymed的结果要好
背景色要好
但是也是细胞浆为主
请丁老师指点指点!!!!!!!!!!!
谢谢!!!!!!!!!

作者: dingwei 时间: 2003-7-27 20:23 标题: 请丁老师及各位前辈指点

买多家试一下，那里好用那。迈新的工作液不错。

作者: 妙手仁心2008 时间: 2003-7-28 12:40 标题: 请丁老师及各位前辈指点

丁老师：
还是老问题－p27的定位，我昨天做了阴性对照。没有非特异性染色，现在是不是可以肯定，我的试验方法上没有错呢？那就是说p27确实在胞浆定位了。不知道您有什么看法那！

作者: 黄河 时间: 2003-7-28 14:49 标题: 请丁老师及各位前辈指点

我做的阴性对照结果也很好.
做了几轮了
还是浆为主!!!!!!

作者: dingwei 时间: 2003-7-28 19:18 标题: 请丁老师及各位前辈指点

我们用的是一抗是DAKO的，1：50，二抗是上海长岛的通用型B液，阳性率不是很高，细胞定位不错，大多是核内颗粒显色，单个散在多见。这是膀胱癌的P27

作者: 妙手仁心2008 时间: 2003-7-28 21:54 标题: 请丁老师及各位前辈指点

丁老师
谢谢您给我的指导，现在的试验结果已经是这样了，我在查一些资料希望能找到合理的解释，不然就惨了！！！！！！！！！！

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