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标题: 请教各位前辈免疫组化中有关苏木素的问题 [打印本页]

作者: 淡淡的雨 时间: 2003-7-25 21:20 标题: 请教各位前辈免疫组化中有关苏木素的问题

各位前辈:病理科用的苏木素染液的配制有多种配方,请问用在免疫组化复染的苏木素中,那一种较理想?为什么? :em02: :em02:

作者: shanghainese 时间: 2003-7-29 05:31 标题: 请教各位前辈免疫组化中有关苏木素的问题

病理科用的苏木素染液的配方有许多种，主要分为退行性和进行性染色两大类。用在免疫组化复染的苏木素，本人喜欢用进行性染色的苏木素，如Gill和Mayer，染完后只要水冲变蓝即可。退行性染色的苏木素，最普及的是Harris，它们也可用于免疫组化复染，但要用盐酸酒精分化和复蓝。

作者: 淡淡的雨 时间: 2003-7-29 21:29 标题: 请教各位前辈免疫组化中有关苏木素的问题

shanghainese老师：谢谢！再请教一下MAYRY’H 和CILL’H的配法，MAYER’H有的书说是把苏木素和DW、硫酸铝钾、碘酸钠混合后过夜，然后才加柠檬酸和水合氯醛，煮拂5MIN，对吗？把硫酸铝钾换成硫酸铝铵可以吗？

作者: shanghainese 时间: 2003-7-29 22:34 标题: 请教各位前辈免疫组化中有关苏木素的问题

1.  Mayer's 苏木素配方
苏木素    1克
蒸馏水    1，000毫升
硫酸铝钾(铵) 50克
碘酸钠    0.2克
柠檬酸    1克
水合氯醛    50克
将苏木素溶于蒸馏水内(需要时刻微热)，加入研细的明矾(硫酸铝钾或硫酸铝铵)，摇动助溶(需要时再加温)，明矾溶解后依次加入碘酸钠，柠檬酸和水合氯醛等试剂。配制后即可供用。
硫酸铝钾可换成硫酸铝铵。
2. Gill's 苏木素配方
苏木素    2克
蒸馏水    730毫升
硫酸铝    17.6克
碘酸钠    0.2克
乙二醇    250毫升
冰醋酸    20毫升

作者: 高山流云 时间: 2003-8-5 20:49 标题: 请教各位前辈免疫组化中有关苏木素的问题

请教 shanghainese 老师和各位老师
我做免疫细胞化学想用苏木素复染，我用苏木素复染5秒，然后用盐酸酒精分化可是每次结果背景都是很差，好象杂质很多胞浆内显色不清楚，是否还要复蓝，用什么复蓝。要很长时间？谢谢！

作者: shanghainese 时间: 2003-8-5 22:32 标题: 请教各位前辈免疫组化中有关苏木素的问题

高山流云 ,您好！
我想您可能用的是Harris之类的(进行性染色)苏木素。您的染色步骤没有问题。问题可能出在苏木素陈旧了，失去了对细胞核的特异性染色以及染色液内有大量的氧化苏木素结晶(杂质)。一般我们每两周换一次苏木素。您不妨试一下新配对苏木素。我用Harris苏木素做免疫组化复染时，如果染10分钟，那一定要用盐酸酒精分化和复蓝(流水冲15至20分钟，必要时用温水加快复蓝)。如果只染1至5秒，就不用分化直接用水冲蓝，然后在显微镜下观察染色是否满意。如果不满意，还可以分化直至满意为止。
希望我的拙见对您的实验有所帮助。

作者: pathypmh 时间: 2003-8-6 20:31 标题: 请教各位前辈免疫组化中有关苏木素的问题

免疫组化复染用的苏木素，DAKO公司推荐的是Mayer苏木素。
我做的时候，一般在Mayer苏木素中过一下，30s吧，也不分化和反蓝的

作者: 高山流云 时间: 2003-8-6 21:08 标题: 请教各位前辈免疫组化中有关苏木素的问题

shanghainese老师和 pathypmh 老师你们好！
谢谢你们的帮助，我一定试试看，不过我还不知道假如我要复蓝的话该用什么复蓝？如何复蓝？谢谢！

作者: shanghainese 时间: 2003-8-6 22:36 标题: 请教各位前辈免疫组化中有关苏木素的问题

如何复蓝？流水冲15至20分钟，必要时用温水<50度(加快复蓝)。

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