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标题: [求助]丁老师等，请问冰冻切片中冰晶的问题？ [打印本页]

作者: 好好 时间: 2003-8-10 23:34 标题: [求助]丁老师等，请问冰冻切片中冰晶的问题？

近来做的小鼠脑片的冰冻切片中出现很多的“空洞”。这是否是由于没有用液氮等速冻至-70度，而是缓冻造成了“冰晶”？该如何避免？
急盼丁老师等给予解答！！！
做些片子真不容易，每一步都会出现各种问题！ :em16: :em16:

作者: frankbj 时间: 2003-8-12 08:22 标题: [求助]丁老师等，请问冰冻切片中冰晶的问题？

脑组织冰冻切片容易出现空洞，建议用液氮速冻

作者: 好好 时间: 2003-8-12 18:30 标题: [求助]丁老师等，请问冰冻切片中冰晶的问题？

frankbj 好：
我的小鼠是用生理盐水、多聚甲醛灌流固定后，多聚甲醛室温后固定2小时，20%蔗糖脱水（4度，过夜），然后冰冻切片。这样可能不需要用液氮速冻吧？
我现在考虑可能是我固定脱水的时间不够，我打算延长后固定、脱水的时间试试看。不知我的想法对吗？

作者: zrz904 时间: 2003-8-13 13:56 标题: [求助]丁老师等，请问冰冻切片中冰晶的问题？

缓慢的冰冻。易出现固定的不均匀而出现空洞。建议快速冰冻，均匀才是关键。

作者: 双面人 时间: 2007-10-23 19:26

我的也是好多空洞

作者: shanghainese 时间: 2007-10-25 12:14

引用:

原帖由好好于 2003-8-12 18:30 发表
frankbj 好：
我的小鼠是用生理盐水、多聚甲醛灌流固定后，多聚甲醛室温后固定2小时，20%蔗糖脱水（4度，过夜），然后冰冻切片。这样可能不需要用液氮速冻吧？
我现在考虑可能是我固定脱水的时间不够，我 ...

仍然需要速冻！

作者: 蓝斑 时间: 2007-10-25 17:17

20％蔗糖过夜脱水，脑组织有没有沉底？或者是不是可以考虑用30％的蔗糖脱水？
我倒不觉得一定要速冻，我做过大鼠的冰冻切片，只用蔗糖脱水就没有很多空泡的。我做的是脑。

作者: shanghainese 时间: 2007-10-25 23:53

引用:

原帖由蓝斑于 2007-10-25 17:17 发表
20％蔗糖过夜脱水，脑组织有没有沉底？或者是不是可以考虑用30％的蔗糖脱水？
我倒不觉得一定要速冻，我做过大鼠的冰冻切片，只用蔗糖脱水就没有很多空泡的。我做的是脑。

作者: jianjie 时间: 2007-10-30 16:24

一般来说，含水丰富的组织容易产生冰晶。冰晶形成一般在-20到-40度。有两种方法可以解决。一是急冻。二是用20%-30%蔗糖沉底。第二种方法我用的很多，比较有效。

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