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标题: 请教各位一个简单的问题 [打印本页]

作者: lumangmang 时间: 2003-8-14 16:19 标题: 请教各位一个简单的问题

免疫组化过程中，具体的时间各个人看法都不同，我想请问这里的高手们，你们用多长时间。
我用的时间是：双氧水封闭：  1小时
            抗原修复    10分钟
            血清封闭    37度一小时
            一抗       过夜一般14－16小时
            二抗       37度 1小时
各位认为时间有问题吗，请指点小弟一下。
还有脱蜡完了，你们一般用什么洗，多长时间，最好能把各位的免疫组化步骤贴出来，大家讨论一下。

作者: 好好 时间: 2003-8-14 22:01 标题: 请教各位一个简单的问题

我觉得你的双氧水、血清封闭时间太长了，一般30分钟就行了。至于一抗、二抗的时间要看不同的抗体，需要自己摸索的。

作者: 黄河 时间: 2003-8-14 22:45 标题: 请教各位一个简单的问题

我用的时间是：双氧水封闭：  半小时
            抗原修复    高温法:修复液预热20分钟,修复15分钟
            血清封闭    室温40分钟(其实跟15分钟效果差不多)
            一抗       4度过夜一般18小时(3PM到8AM)
            二抗          室温半小时
            三抗       室温半小时
            苏木素       1.5分钟
            盐酸分化液 1到两秒
比较以下,除了抗原修复,楼主的时间好象都比我做的时间长.

作者: frankbj 时间: 2003-8-15 09:14 标题: 请教各位一个简单的问题

         双氧水封闭：  15分钟
         抗原修复    高温法:修复液预热20分钟,修复15分钟
         血清封闭    室温15分钟/37度
         一抗    二抗三抗（不同公司提供试剂盒都有说明的，可以稍长些）
         苏木素       1.5分钟
         盐酸分化液 1到两秒

作者: lumangmang 时间: 2003-8-15 19:58 标题: 请教各位一个简单的问题

多谢各位指教，各位结果理想吗

作者: 黄河 时间: 2003-8-16 01:05 标题: 请教各位一个简单的问题

有理想的
有不理想的
不理想的主要是试剂的问题
跟我的实验步骤好象关系不大
因为反复调整时间
没有多大区别

作者: fangdang 时间: 2003-8-19 11:06 标题: 请教各位一个简单的问题

我用的时间是：脱蜡完了，可用梯度酒精水化后用自来水冲洗即可
            3-10%双氧水封闭：10分钟
            抗原修复    按各抗体不同要求决定
            血清封闭    10分钟
            一抗       4.c 冰箱过夜.或室温下一小时.
            二抗       37度  10分钟

            对比染色后可以用PBS返蓝可节省很多时间.

作者: chunyan111 时间: 2003-8-21 08:38 标题: 请教各位一个简单的问题

请问各位：3%的H2O2是直接滴加到玻片还是用甲醇稀释后浸泡？

作者: 好好 时间: 2003-8-23 16:33 标题: 请教各位一个简单的问题

甲醇稀释后浸泡！

作者: fangdang 时间: 2003-8-26 16:29 标题: 请教各位一个简单的问题

我的用法:3%的H2O2是用甲醇稀释后浸泡

作者: dingwei 时间: 2003-8-29 05:46 标题: 请教各位一个简单的问题

双氧水我用蒸馏水稀释，比较省钱。以前也用自来水配，好像也没差异。

作者: 淡淡的雨 时间: 2003-9-12 17:54 标题: 请教各位一个简单的问题

请教丁老师，用蒸馏水代替甲醇也是配3%的浓度吗？作用时间是多长？请指教。谢谢！

作者: dingwei 时间: 2003-9-15 19:28 标题: 请教各位一个简单的问题

一样

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