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标题: 谢谢两位朋友孟奎和fangdang [打印本页]

作者: aline 时间: 2003-12-18 22:35 标题: 谢谢两位朋友孟奎和fangdang

[这个贴子最后由aline在 2003/12/19 10:49pm 编辑]

先谢谢两位。我是刚接触免疫组化，很多东西都不懂，还是在摸条件的阶段。最近在做肾穿组织，一抗是MHCII,做了抗原修复，高压方法，DAB显色不了，不知道是不是过程有问题？

作者: fangdang 时间: 2003-12-22 14:46 标题: 谢谢两位朋友孟奎和fangdang

阐述步骤/

作者: aline 时间: 2003-12-23 22:37 标题: 谢谢两位朋友孟奎和fangdang

这两天做的片子已经有阳性结果，但不是很好。步骤如下：肾穿组织石蜡切片脱蜡-高压修复3或4分钟-0.3%过氧化氢5分钟-一抗4oC过夜-二抗1h（已标辣根过氧化酶）-DAB显色-苏木素复染。也做了阴性对照，背景很干净。其他片子阳性部位不是很明显。

作者: fangdang 时间: 2003-12-24 16:17 标题: 谢谢两位朋友孟奎和fangdang

抗体是即用型抗体还是浓缩型的?还有我不明白是所用的是什么样的免疫组化法?为什么二抗要一个小时.?

作者: 孟奎 时间: 2003-12-24 22:06 标题: 谢谢两位朋友孟奎和fangdang

肾穿刺组织的免疫组化染色，抗原修复应高压修复加胰酶消化1－3分钟，然后进行过氧化氢及血清封闭，一抗1小时，检测系统使用DAKO公司的EnVision 系统，显色使用AEC显色，对比明显，注意不能酒精脱水及二甲苯透明，衬染色也不能使用含有酒精的苏木精，用Mayer苏木精后，直接应用水性封片剂。我们应用此方法已经5年，效果不错，联系电话025－80860193办公室

作者: 孟奎 时间: 2003-12-24 22:07 标题: 谢谢两位朋友孟奎和fangdang

二抗半小时37度

作者: aline 时间: 2003-12-25 20:39 标题: 谢谢两位朋友孟奎和fangdang

一抗是浓缩型，二抗是即用型。我们咨询了公司，他们建议二抗一小时，所用的免疫组化法是由公司提供的方法进行，其实类似PAP法，只是辣根过氧化酶仪标记在二抗上。还有我们做过血清封闭，与不做没有区别，公司的技术员认为做与不做也是没有区别的。所以我省略了这一步。孟老师说的不能酒精脱水及二甲苯透明那应该使用什么？显色为什么使用AEC？衬染色为什么也不能使用含有酒精的苏木精？还有就是为什么要加胰酶消化1－3分钟？谢谢！

作者: fangdang 时间: 2003-12-26 13:29 标题: 谢谢两位朋友孟奎和fangdang

AEC是一种显色底物,在酒精中会褪色,直接用水性封片剂.
还有就是为什么要加胰酶消化1－3分钟？为了更充分的暴露抗原.

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