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标题: 请教间接免疫荧光 [打印本页]

作者: zhaozhigang    时间: 2004-12-19 22:46     标题: 请教间接免疫荧光

版主老师,请教间接免疫荧光的方法
一抗是不是一定要进口的阿
二抗呢,中山公司的FITC标记的可以吗,他们自己说是进口分装的
如果可以,怎么稀释呢
还有抗体稀释是不是用PBS好些呢
谢谢!
作者: lacrimosa    时间: 2004-12-19 23:15     标题: 请教间接免疫荧光

可以用PBS稀释。一般说明书上有稀释比例的,但具体要看你的抗原含量。一抗稀释最好做个梯度,我们做的是一抗按1:100,1:200,1:400,1:800的梯度稀释,二抗是羊抗小鼠IgG,稀释度是1:200。不好意思,我才开始做免疫组化,懂的不多。
作者: zhaozhigang    时间: 2004-12-19 23:33     标题: 请教间接免疫荧光

多谢
再请问步骤和荧光2抗是那家公司的
作者: shanghainese    时间: 2004-12-20 05:06     标题: 请教间接免疫荧光

引用:
下面引用由lacrimosa2004/12/19 11:15pm 发表的内容:
可以用PBS稀释。一般说明书上有稀释比例的,但具体要看你的抗原含量。一抗稀释最好做个梯度,我们做的是一抗按1:100,1:200,1:400,1:800的梯度稀释,二抗是羊抗小鼠IgG,稀释度是1:200。不好意思,我才开 ...
很对。应与奖励。
作者: 可乐猫    时间: 2004-12-20 17:19     标题: 请教间接免疫荧光

间接免疫荧光法步骤如下(别的组织我还没做过只做过皮肤,所以仅供参考)
我用正常人皮肤或小白鼠舌做冰冻切片吹干当底物;
PBS洗,DW洗共2-3次吹干。
滴加各种稀释度的患者血清(1:20;1:40;1:80;1:160;1:320;……)37度恒温水温箱内,30分钟。
PBS洗,DW洗吹干。
滴加IgG抗体,进口的1:100,现在已不买进口的了太贵! 国产的北京邦定公司的羊抗人1:10,在恒温水温箱内37度30分钟。
PBS洗二次,DW洗每次8-10分钟。
甘油缓冲液封片
荧光显微镜观察。

作者: zhaozhigang    时间: 2004-12-20 22:32     标题: 请教间接免疫荧光

请问可乐猫版主
我都一抗是小鼠或兔源的,用羊血清封闭可以吗
作者: fangdang    时间: 2004-12-21 10:07     标题: 请教间接免疫荧光

我都一抗是小鼠或兔源的,用羊血清封闭可以吗 ?可以,封闭用的羊血清是非免疫的。
作者: shanghainese    时间: 2004-12-21 10:09     标题: 请教间接免疫荧光

引用:
下面引用由zhaozhigang2004/12/20 10:32pm 发表的内容:
请问可乐猫版主
我都一抗是小鼠或兔源的,用羊血清封闭可以吗
应该可以。




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