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标题: 请教如何消除二抗背景着色 [打印本页]

作者: cls2004 时间: 2005-1-8 14:18 标题: 请教如何消除二抗背景着色

大家好，我正在做小胶质细胞免疫组化，但遇到一个令我头疼的问题，二抗非特异性着色。具体情况是：
1、标本：脑缺血SD大鼠，先经心脏生理盐水，4%多聚甲醛，后固定，30%蔗糖脱水，冰冻切片12微米。
2、一抗是小鼠来源单克隆CD11b
3、二抗我用过两种：一是Sigma羊抗小鼠，另一个是中山的马抗小鼠。
问题是：无论我用哪种二抗，DAB显色还是荧光显色，阴性片都呈神经元样非特异性着色，但是做荧光时，这种非特异性着色和DAPI显色又不重叠，说明非特异性着色不是细胞。难道小鼠来源的二抗与大鼠有同源性，我真是搞不懂，非常希望能得到各位同仁的尽快帮助！

作者: shanghainese 时间: 2005-1-9 13:37 标题: 请教如何消除二抗背景着色

不知你在做实验时设立了 isotype control 和 PBC 空白对照没有？如果设了来，这两个阴性对照是否有非特异性着色？真是非特异性着色，那只有换好的二抗。
还有你的CD11b单抗是什么克隆名，是否能用于4%多聚甲醛固定的组织？

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