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[求助]冰冻切片冰晶消除方法
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作者:
percy
时间:
2005-1-15 14:55
标题:
[求助]冰冻切片冰晶消除方法
冰冻切片冰晶如何消除? :em06:
作者:
ylzhao
时间:
2005-1-16 08:43
标题:
[求助]冰冻切片冰晶消除方法
该网址有相关信息:
http://www.biox.cn/bbs/dispbbs.asp?BoardID=5&ID=64&page=1
组织冻结过程中,细胞内、外的水分会形成冰晶,冻结的速度愈慢,冰晶颗粒愈大,可严重影响组织、细胞的形态结构。因此制备冻块时要求低温、速冻。
1、冰冻组织块的常用方法
• 液氮中冰冻:组织投入液氮中 (一196C)中10~20sec;
• 干冰中加入丙酮(或异戊烷),液体立即气化起泡,温度降至一70C ,将组织投入,若在干冰丙酮中置一盛有异戊烷的容器,组织投入该容器内结冻则更好;
– 上述组织在速冻时应浸埋于OCT包埋剂或甲基纤维素糊状液内,以保护组织。
– 制成冻块后若需保存,应以铝箔或塑料薄膜封包,贮存于-70 C冰箱。
2、切片
• 供免疫组化用的冰冻切片同样要求附贴平整,并有连续性。
• 载玻片也应清洁无油污,但一般无需涂抹粘附剂;
• 切片时,使用恒温冷冻切片机,在箱内温度-25 C 。切片厚度一般为4~8m。
3、切片后处理
• 切好的冰冻切片,室温下自然晾干1~2h后,入4C丙酮固定10min,待干燥后作免疫组化染色或封存于-20℃。
• 冰冻切片由于切片技术要求较高,不易得到连续性很好的切片,其形态结构亦不如石蜡片,且冻块和切片不便于长期贮存,因此冰冻切片的应用受限。
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