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标题: 急！！！！求助！！！ [打印本页]
作者: 新手    时间: 2002-12-24 16:53     标题: 急！！！！求助！！！

请教各位老师：
  现在在做肝脏石蜡切片的免疫组化，完全按照操作步骤脱腊，阻断内源过氧化物酶,高压锅修复抗原,加封闭血清,一抗,二抗,三抗,DAB显色，，镜下观察可见着色，苏木素复染，但是再梯度酒精脱水，二甲苯透明后，整张片子就变成了棕褐色，连着几次都是这样，不知为什么，请教同学，说不用二甲苯，可能是二甲苯原因，我觉得没有道理，特请教各位老师。
  另：我作的是胞核表达，加苏木素会影响结果吗？
   谢谢！！！
作者: DINGWEI    时间: 2002-12-24 19:30     标题: 急！！！！求助！！！

你显色后可能就是棕褐色，因没透明，看的不是很清楚，二甲苯透明后，就清楚了。会不会是这样？
作者: 临风揽月    时间: 2002-12-25 16:42     标题: 急！！！！求助！！！

封片后再看！
作者: frankbj    时间: 2002-12-27 22:23     标题: 急！！！！求助！！！

可以不衬染。
作者: 冰雪    时间: 2003-1-14 19:39     标题: 急！！！！求助！！！

不妨试一试用甲基绿复染。
作者: cambri-tea    时间: 2003-1-14 22:15     标题: 急！！！！求助！！！

当然有影响,你做的是核染色,而苏木精则是染核的,你做的当然没结果了呀!
/你是染什么组织的?目的是什么?
如是胞膜抗体或胞浆抗体则用苏木精衬染细胞核,起到烘托作用,而且可看清细胞形态.
但你是核抗体,你需查查用什么方法好,或试试不做核衬染,用伊红染衬染胞浆,切不可用苏木精,而且伊红不要染太甚!
另,与二甲苯无关!!
BY THE WAY:甲基绿也是染核的,不可用
作者: 临风揽月    时间: 2003-1-15 14:07     标题: 急！！！！求助！！！

不对！不论是染核还是染浆都可以用苏木素或甲基绿衬染！！！
作者: cambri-tea    时间: 2003-1-15 20:38     标题: 急！！！！求助！！！

苏木精是衬染胞核的!!!!!而你的一抗是核抗,阳性在核表达,怎么可以还用衬染膜抗体和胞浆抗体的衬染呢?当然不可能好喽.
我的建议,不要用核衬染剂衬染,衬染胞浆为好,试试伊红吧,不过切记不可染深!!!!
作者: cambri-tea    时间: 2003-1-15 20:44     标题: 急！！！！求助！！！

不是吧,你的免役组化阳性是在核内表达,怎么还衬染核呢?衬染了以后你的阳性或衬染的不是就看不清了吗???何况,衬染只是为了更好的看清细胞形态呀,不是吗?
若能用,请阐述理由,谢谢
作者: 冰雪    时间: 2003-1-16 20:36     标题: 急！！！！求助！！！

本人赞成"临风揽月"说法,苏木素.甲基绿都可以用来衬染.
作者: cambri-tea    时间: 2003-1-16 21:28     标题: 急！！！！求助！！！

我问了一下其他人的意见,如下:
      用苏木精复染可以,但一定要时间很短,几秒种就行,只要有一点苏木精的颜色衬染就行,你也可试试!
     BY THE WAY  你复染是时间是多久呢?
     做完请告诉我行不行,谢谢!
作者: pipilong    时间: 2003-1-17 22:05     标题: 急！！！！求助！！！

我认为一般的片子，苏木素复染3分钟差不多，如果片子在修复过程中用了盐酸等酸化的较重，可以适当延长时间。
作者: 临风揽月    时间: 2003-1-18 10:36     标题: 急！！！！求助！！！

[这个贴子最后由临风揽月在 2003/01/27 10:38am 编辑]

不知道楼上的朋友 cambri-tea  是否做过免疫组化？没有做过也应该看过吧！但是你的观点实在是！看看书吧！
作者: pipilong    时间: 2003-1-19 23:18     标题: 急！！！！求助！！！

这只是我的经验，效果不错。
我有的抗体，如核抗体，就用盐酸修复，这有什么不对？
作者: Qzhwei    时间: 2003-1-30 20:06     标题: 急！！！！求助！！！

我也有这样的问题！
作者: dingwei    时间: 2003-1-31 15:16     标题: 急！！！！求助！！！

引用:
下面引用由临风揽月在 2003/01/15 02:07pm 发表的内容：
不对！不论是染核还是染浆都可以用苏木素或甲基绿衬染！！！
同意，只要淡染，分的很清楚。
作者: 刘正国    时间: 2003-2-9 20:17     标题: 急！！！！求助！！！

可能有两种情况：[1]大概你苏木素染的时间太长又没有用盐酸酒精分化；[2]一次有多少切片？显色时第一张切片和最后一张切片间隔有多长时间？如果30-40张切片一直使用一缸停显水，水中含有大量DAB你以为已经停止显色了，其实不然。因为我也遇到此类问题。
作者: 007    时间: 2003-2-10 14:54     标题: 急！！！！求助！！！

楼上的说的很有道理！



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