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标题: antigen decloaker是不是就是抗原修复液啊 [打印本页]

作者: yinogirl    时间: 2005-6-15 16:45     标题: antigen decloaker是不是就是抗原修复液啊

我最近跟着国外的一篇文献在做免疫组化,他用的是国外一家公司的antigen decloaker,我自己用的是中衫的柠檬酸盐缓冲液,现在作出来什么结果也没有,构成性表达的抗原也没有显示,不知道是哪个环节出了问题,请教各位怎么办,谢谢啦!
作者: shanghainese    时间: 2005-6-15 23:35     标题: antigen decloaker是不是就是抗原修复液啊

antigen decloaker 应该是10X pH 6.0 柠檬酸盐缓冲液.
http://www.biocare.net/equipment.htm

作者: fangdang    时间: 2005-6-15 23:44     标题: antigen decloaker是不是就是抗原修复液啊

做不出结果有许多原因,antigen decloaker是抗原修复液通常是指0.01M的citrate。就此你可能没错。没有详细的操作步骤说明,帮不了你。
作者: liuhuaqin    时间: 2005-6-16 10:48     标题: antigen decloaker是不是就是抗原修复液啊

最好是按自己购买试剂的说明书进行操作。
作者: yinogirl    时间: 2005-6-16 11:14     标题: antigen decloaker是不是就是抗原修复液啊

我用的抗体还没有商品化,是别人自己制备的单抗,操作步骤都是按照她们的文献来的,从高压修复条件,到一抗二抗浓度基本上都按照那篇文献来操作,由于做不出来,曾经试过很多其他方法,但是始终没有任何结果,真不知该怎么补救,还有,跟烤片的温度有没有关系啊,我一般都是70度,之前几个抗体都做的挺好,为什么这个出不来呢。
作者: liuhuaqin    时间: 2005-6-16 11:47     标题: antigen decloaker是不是就是抗原修复液啊

烤片70度多长时间?高压修复的时间?着色部位?一抗浓度是多少?是否做过阳性对照?
作者: yinogirl    时间: 2005-6-16 15:59     标题: antigen decloaker是不是就是抗原修复液啊

70度15分钟,高压10kpa3分钟,一抗从0.7,1.4,2.8一直到11.2都试过,阳性对照也作不出来,阳性定位根据文献应该是在小肠粘膜上皮,类似于神经内分泌细胞定位的细胞浆内,我用过回肠,结肠都作不出来,是不是抗体有问题啊?
作者: shanghainese    时间: 2005-6-16 23:46     标题: antigen decloaker是不是就是抗原修复液啊

引用:
下面引用由yinogirl2005/06/16 11:14am 发表的内容:
我用的抗体还没有商品化,是别人自己制备的单抗,操作步骤都是按照她们的文献来的,从高压修复条件,到一抗二抗浓度基本上都按照那篇文献来操作,由于做不出来,曾经试过很多其他方法,但是始终没有任何结果,真 ...
也许您的这个抗体不能用在石蜡切片上。
不如在冰冻切片是试试。
作者: liuhuaqin    时间: 2005-6-17 11:31     标题: antigen decloaker是不是就是抗原修复液啊

70度15分钟烤片时间短,可延长到1h左右。抗原修复可用微波中档10分钟。主要考虑一抗的问题,可用冷冻切片试试或多做几例阳性片。
作者: 闲云    时间: 2005-6-17 11:36     标题: antigen decloaker是不是就是抗原修复液啊

冰冻都没有结果的话就可能是抗体自身问题了。
作者: liuhuaqin    时间: 2005-6-17 11:42     标题: antigen decloaker是不是就是抗原修复液啊

必须标本肯定为阳性和适当的抗体浓度。
作者: yinogirl    时间: 2005-6-20 15:42     标题: antigen decloaker是不是就是抗原修复液啊

谢谢各位指点迷津,我先试试冰冻,同时二抗浓度相应提高,有问题在请教各位,谢了!
作者: 闲云    时间: 2005-6-20 16:44     标题: antigen decloaker是不是就是抗原修复液啊

冰冻都没有的话就没什么搞头了。
作者: yinogirl    时间: 2005-6-21 12:33     标题: antigen decloaker是不是就是抗原修复液啊

我免疫组化用的是辣根过氧化物酶显色系统,之前要用3%过氧化氢阻断,虽说阻断的是内源性过氧化物酶,可是有人告诉我阻断也会影响抗原的免疫原性,所以做不出来可以试着不阻断,尝试了一下还是不行没有任何结果,就是有个疑问,真的阻断会影响抗原的免疫原性吗?
作者: shanghainese    时间: 2005-6-21 13:10     标题: antigen decloaker是不是就是抗原修复液啊

不会
作者: yinogirl    时间: 2005-7-9 17:07     标题: antigen decloaker是不是就是抗原修复液啊

冰冻也没做出来,实在想不出还有什么招了,一个月的时间就这么浪费掉了




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