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标题: [求助]我的大鼠脊髓小胶质细胞为何总染不出来？（焦急万分） [打印本页]

作者: penigy 时间: 2005-6-26 23:18 标题: [求助]我的大鼠脊髓小胶质细胞为何总染不出来？（焦急万分）

各位老师，我用serotec的mouse anti rat cd11b（克隆号OX42）来标记小胶质细胞，二抗是博士德的羊抗兔/小鼠，采用的修复法是微波修复，一抗曾试过37℃1－3h、4℃孵育24h，都做不出来，二抗也试过室温10min、37℃1h等也都没用。同批用其它抗体标记的抗原（相同标本切出来的切片）却都做出来了。总是找不出原因，请各位老师或做过同一抗原的前辈不吝赐教！

作者: shanghainese 时间: 2005-6-27 00:45 标题: [求助]我的大鼠脊髓小胶质细胞为何总染不出来？（焦急万分）

这个克隆的抗体（OX-42）不能用于福尔马林固定的石蜡切片。所以您做不出来。

作者: penigy 时间: 2005-6-27 15:27 标题: [求助]我的大鼠脊髓小胶质细胞为何总染不出来？（焦急万分）

谢谢斑竹的回复。但我很想知道为什么这个克隆号的一抗不能用于石蜡切片的呢？我的确做的是石蜡切片。如果再做一批冰冻切片标本很是花费，请问有什么办法可以补救的吗？

作者: shanghainese 时间: 2005-6-28 00:27 标题: [求助]我的大鼠脊髓小胶质细胞为何总染不出来？（焦急万分）

引用:

下面引用由penigy在 2005/06/27 03:27pm 发表的内容：
谢谢斑竹的回复。但我很想知道为什么这个克隆号的一抗不能用于石蜡切片的呢？我的确做的是石蜡切片。如果再做一批冰冻切片标本很是花费，请问有什么办法可以补救的吗？

许多许多单克隆抗体都不能用在石蜡切片上。因为这些抗体所反应的抗原上的表位在石蜡切片上发生了改变，抗体就无法与抗原结合了。至於有什么办法可以补救，我认为很难，至少对您来说很难，需要重新develop,而且不一定成功。
最好的办法是： 1，作在冰冻切片标本上。 2，是找能用于石蜡切片的抗体。
祝您好运气。

作者: penigy 时间: 2005-6-28 01:24 标题: [求助]我的大鼠脊髓小胶质细胞为何总染不出来？（焦急万分）

再次感谢斑竹的细心解答。看来我得重做一批标本用冰冻切片了。

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