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标题: 细胞涂片染色分析 [打印本页]
作者: yds    时间: 2005-3-21 22:35     标题: 细胞涂片染色分析

[这个贴子最后由yds在 2005/06/07 08:55pm 编辑]

学习细胞学时，对常规的技术环节曾作了大致总结，请指正：
染色不良原因分析
细胞涂片常规巴氏染色步骤及原理：
具体步骤：
1、涂片投入95%酒精固定液   固定15分钟。
   目的：细胞及胞内物质形态稳定（由半液态变为半固态），易于染色。
   原因：固态比液态（流动性）更具稳定性，着色更迅速，染色效果也更稳定。
2、水洗  用浓度由高到低的 梯度酒精 入水 或直接 自来水漂洗。
   目的：脱醇—置换出细胞内酒精，以便使水溶性苏木素进入。
3、苏木（水溶液）染核  时间灵活掌握，根据镜下观察染色效果 确定。
4、水洗 洗去过多残留苏木染液，
5、碱水（饱和碳酸锂）返蓝
目的：使苏木色精进一步形成，且使胞浆偏碱性，以便更好的与酸性染料结合。
6、水洗去多余碱水。
7、脱水  用浓度由低到高的 梯度酒精 或直接由水进入95%酒精。
8、橘黄和EA（O—E染色）染胞浆
   操作：每次染后 进入 95% 酒精漂净多余染液，以保证 不影响 下一步。
9、无水酒精脱水 —— 二甲苯透明 —— 树胶封固。
可能出现误差的步骤：
1、固定时间要求是：大于15 分钟，小于48小时。
如果制完片后马上进入水洗染色，固定效果必然欠佳。
2、水洗脱醇 应保证足够的时间和换水次数，
否则脱醇不彻底，会干扰水溶性苏木素进入细胞内进行染色反应。
3、苏木素的染色效果与本身的浓度、纯度，染色反应的速度直接相关。
   此外，染色速度还受温度影响（温度越高，染色速度越快，效果越好）。
   
所以：本步骤注意事项为：
苏木素的质量——每日过滤并加新液；
天气温度（室温）的变化——调整时间，温高则时间短，温度低则时间长，皆以镜下观察的效果为准灵活掌握。
4、碱水返蓝：
   为水溶液,其浓度和纯度都会影响返蓝效果。
   如果碱水使用时间过长，未及时更换，其浓度、纯度必然下降。
   为加快速度或工作时间调整，玻片放入碱水中的时间常常偏长或偏短。
   偏短——苏木色精形成不充分；
   偏长——涂片在水溶液中浸泡过久会影响细胞固定效果,从而影响染色效果。
   以至于影响苏木素的显色效果和下一步胞浆染色效果。
5、橘黄和EA的染色效果，
由 染液质量（配方、浓度、纯度）和染色时间 决定。
   且橘黄和EA一般都使用醇溶液，所以，此前的酒精漂洗脱水步骤也很重要。
   
   此外，温度对效果的影响也和苏木素一样。
   
6、酒精的浓度、纯度受温度和使用率的影响。
   气温上升，会使酒精挥发——浓度下降，导致以下效果
   ● 固定效果不佳，影响染色。
   ● 脱水不彻底，影响胞浆染色；
   ● 脱水不彻底，影响二甲苯透明。
7、透明
   二甲苯透明不充分，镜下观察的效果就是结构模糊——不透明、不清亮的感觉。
   比喻：透明良好的效果象是泡在清水中，清澈见底；
         不透明 或透明效果不好 就象是泡在米汤或胶水中，（或是嵌在毛玻璃内），
         感觉模模糊糊，看不清结构。
此外，还可用石蜡油做透明剂。
8、有些医院的巴氏染色效果很好，几年不褪色，而效果不好的最快三五个月就开始褪色。
   我观察实验的结果是：EA染色有问题。褪色的涂片残留的颜色为红色，而且是苏木精被还原后呈现的红色，而EA中的伊红、淡绿颜色全无；所以，应该注意：
   伊红、淡绿的染色效果——包括原液的质量和配制；如酸碱度的调整；还有就是操作。
   
9、所有的染液和洗液都应定时过滤、定时更换。
其中的很多原理至今我也没弄清楚，翻了一些书也是操作过程、结论明确，但原理未分析透彻，或许是因为自己水平太浅，期待出现一本简明扼要因果清晰的书。

                                               
作者: fangdang    时间: 2005-3-23 22:09     标题: 细胞涂片染色分析

一篇好文章，顶。
作者: DINGWEI    时间: 2005-4-6 07:11     标题: 细胞涂片染色分析

也顶一下
作者: 寸草心    时间: 2005-4-10 19:38     标题: 细胞涂片染色分析

  值得拜读。
作者: merry70    时间: 2005-5-20 21:35     标题: 细胞涂片染色分析

对了，看来楼顶对巴氏染色很有研究，我现在正想配置。请问具体配方？？？量、温度等。
作者: erhu910324bl    时间: 2005-6-6 00:05     标题: 细胞涂片染色分析

确实不错，不知可否请教一下HE染色的好方法？
作者: yds    时间: 2005-6-7 20:58     标题: 细胞涂片染色分析

其实以上所有细节书中都有强调，只是具体操作者需用心而已。
如果还是做细胞涂片的话，HE染色的基本要点和EA差不多。
没什么秘诀。
作者: 雪曦    时间: 2005-7-25 19:47     标题: 细胞涂片染色分析

受益非浅，谢谢！
作者: 唐平    时间: 2005-10-4 22:08     标题: 细胞涂片染色分析

的确是一篇好的范文！太好了，谢谢你！对于我们基层病理工作者有很大的帮助



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