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标题: 抗体孵育时间 [打印本页]
作者: myzh    时间: 2006-8-10 19:53     标题: 抗体孵育时间

在做免疫组化时，一抗孵育时间久了容易有背景着色。
不知二抗和三抗是不是也是这样。
我想二抗和三抗应该没有时间限制吧时间长一点也没什么吧。
请高手回答一下。
最好斑主告知一下。
作者: 喜力    时间: 2006-8-10 20:15

按照孵化标准时间做,免疫组化染色仪通常设定是2抗20分钟,3抗30分钟,DAB=5分钟(你可以自己参考3,4,5等各个时间)

整体效果要看1抗,2抗及DAB.不能单独看一个.

目前我这里在用的是日本2抗,鼠/兔双抗人,效果好,价格也不错.
作者: shanghainese    时间: 2006-8-12 23:11

引用:
原帖由 myzh 于 2006-8-10 11:53 发表
在做免疫组化时，一抗孵育时间久了容易有背景着色。
不知二抗和三抗是不是也是这样。
我想二抗和三抗应该没有时间限制吧时间长一点也没什么吧。
请高手回答一下。
最好斑主告知一下。
正如您所说的"一抗孵育时间久了容易有背景着色", 但是这个一抗孵育时间久了"的定义是如何下的呢? 多长时间算是久了呢? 另外在孵育时温度也是非常重要的. 比如许多人用37度孵育1小时. 那么37度孵育过夜呢?  同样是孵育过夜, 放在4度就没事.  不过本人建议一抗在20度孵育1小时. 不建议用37度.
二抗和三抗也是这样.
本人建议二抗和三抗在20度孵育半小时.

不过各国,各地,各实验室的情况不同,条件不一. 故不要照搬,请各位同行自行调整以求得最佳结果.



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