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标题: 求教高手！ [打印本页]

作者: ls168520 时间: 2006-9-1 19:34 标题: 求教高手！

我们科做免疫组化步骤如下：1，脱蜡至水
                                    2，片子全部用高温修复
                                    3，冷却后放入蒸馏水
                                    4，画圈，pbs冲洗3*3分钟
                                    5，加一抗
                                    6，4度过夜
                                    7，pbs冲洗3*3分钟
                                    8，加二抗
                                    9，pbs冲洗3*3分钟
                                    10，DAB显色
                                    11，衬染
                                    12等
请各位高手指教，我老是感觉不妥，少了几步，但做出来效果还好，你们说这样行吗？请说具体点！

作者: fangdang 时间: 2006-9-1 21:45

我想知道你是用什么试剂盒(那种方法sp?POLYMER?)

作者: shanghainese 时间: 2006-9-2 10:17

引用:

原帖由 ls168520 于 2006-9-1 11:34 发表
我们科做免疫组化步骤如下：1，脱蜡至水
                                    2，片子全部用高温修复
                                    3，冷却后放入蒸馏水
                                 ...

免疫组化步骤有很多.
选择那一种要根据所使用的试剂和实验室的条件而定.

作者: colin 时间: 2006-9-3 10:26

好象你没有用阻断哦!

作者: ls168520 时间: 2006-9-3 19:50

我觉得不管用什么试剂盒都应该要有阻断，还有修复也不是全用同一种方法如柠檬酸抗原修复，要根据所选的不同抗体选择修复方法。这些都是我的疑惑，我看别的地方的二步法也没这么省的，还请各高手能指点一二，说说原因，小弟在此谢谢了！

作者: 蓝宝石 时间: 2006-9-5 11:44

我们的做法：切片脱蜡至水后，用过氧化氢阻断，用高温修复，冷却后放入蒸馏水洗３＊３分钟，ＰＢＳ冲洗3*3分钟，山羊血清封闭２０分钟，再一抗．．．．．．

作者: 江山如画 时间: 2006-9-6 12:22

楼上说的SP法才用血清封闭,现在的都不用封闭了.....

作者: ls168520 时间: 2006-9-6 19:24

现在的都不用封闭了？这个到是没听说，我看书上那些方法好象都有这步。我的疑惑还有一个就是所有的片子都统统修复，而且都是高温修复。这样也行吗？有的不是不用修复的？总的还是谢谢各位的答复！

作者: shanghainese 时间: 2006-9-7 09:23

引用:

原帖由 江山如画 于 2006-9-6 04:22 发表
我的疑惑还有一个就是所有的片子都统统修复，而且都是高温修复。这样也行吗？

对于这类问题已经回答过多次. 这里再说一遍.
抗原修复与否是由所选用的一抗而定. 并非千篇一律都要修复.用什么样的修复? 什么条件必须依一抗而定. 一抗不同修复也可能有所不同.
抗体销售公司在出售一抗时应该会提供这些信息.
入果不按抗体销售公司提供的技术要求去做, 很可能得出错误的结果, 会冒责任风险. 这点请大家切记.

http://bbs.dingw.com/viewthread.php?tid=4083&extra=page%3D1

作者: ls168520 时间: 2006-9-7 19:35

引用:

原帖由 shanghainese 于 2006-9-7 09:23 发表

抗原修复与否是由所选用的一抗而定. 并非千篇一律都要修复.用什么样的修复? 什么条件必须依一抗而定. 一抗不同修复也可能有所不同.
抗体销售公司在出售一抗时应该 ...

这个我也知道，我也这样和他们解释了，关键是我们这边不这样，他们还说不管怎样，你修复了总比不修复要好，所以也没办法只是想请教你们能给出一个答案，很明确的告诉我这种做法是不对的，然后在给一个充分的理由，我也好和他们说。谢谢了！

作者: shanghainese 时间: 2006-9-7 22:35

没有必要与他们讲道理，因为讲了他们也听不懂。
您只要告诉他们出了事您不负责就可以了。

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