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标题: ＴＰＡ涂抹小鼠皮肤后　做冰冻切片　染炎性细胞　非常郁闷中 [打印本页]

作者: clearsky0913 时间: 2007-1-11 12:27 标题: ＴＰＡ涂抹小鼠皮肤后　做冰冻切片　染炎性细胞　非常郁闷中

　ＴＰＡ涂抹小鼠皮肤后　做冰冻切片　染炎性细胞　非常郁闷中

　ＴＰＡ涂抹后２４h取材，立即用ＯＣＴ包埋，冰冻切片，刀头零下４０度，机箱零下２０度，切４微米－８微米都试过，
切完晾１５分钟或不晾，冷丙酮固定１０分钟，室温或３７度晾4小时至过夜都试过，
　　ＰＢＳ５＊２
　　Ｈ２Ｏ２　３％　１０分钟
　　ＰＢＳ　５＊３
　　二抗血清　１：５０　半小时
　　一抗　ＣＤ１１Ｂ（染巨噬细胞）；ＧＲ１（染中性粒细胞）１：５０；１：１００；１：１５０都试过
　　ＰＢＳ　５＊３
　　二抗(兔抗大鼠ＩgG)　１：２００
　　ＰＢＳ　５＊３
　　三抗（avidin）　１：２００
PBS 5*3
DAB 显色
结果：在十一之前做过，片子形态尚好，很清晰，只是有些非特异．
节后用了各种条件，片子脱的很厉害，形态差，阳性也似乎没有或
很弱，不知是不是温度影响很大．物理特性所致？从３７度到室温
的影响，还是什么原因，请高手指点，不胜感激．
　　荧光的也做了，效果不好．

作者: clearsky0913 时间: 2007-1-11 16:15

师兄师姐帮帮忙吧

作者: shanghainese 时间: 2007-1-13 14:57

很可能是第一次切过片子后,冰冻包埋快没有保存好.

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