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标题: 请教：PAS染色高手 [打印本页]

作者: bagelo 时间: 2007-1-24 22:25 标题: 请教：PAS染色高手

PAS染色不上色是什么原因呢？试剂是从公司买的，以前用还很好用，最近几次染色颜色都很浅或者几乎没颜色，是不是温度的问题，以前我在室温染半小时，颜色很好。雪夫试剂是应该放在4℃保存吗？用之前恢复到室温。还和什么因素有关呢？请大家帮我分析一下吧，谢谢了

作者: ylzhao 时间: 2007-1-25 20:49

PAS染色不上色多半是雪夫氏试剂失效,雪夫氏试剂有失效期,雪夫氏试剂质量好可贮存1年,质量不好的3个月甚至更少.无论公司购买还是自己配制随着时间推移都会失效.冷冻保存可以延长雪夫氏试剂的有效期.

[ 本帖最后由 ylzhao 于 2007-1-25 12:52 编辑 ]

作者: bagelo 时间: 2007-1-25 21:43

哦，是这样啊，谢谢了，请问有雪夫氏试剂的配方吗？我想自己配着试试看

作者: ylzhao 时间: 2007-2-4 09:39

试剂配制：
（1）0.5%过碘酸（HIO4）水溶液或70%酒精溶液。
（2）Schiff氏试剂。
碱性品红                                        1g
蒸馏水                                           200ml
1N盐酸（98.3ml比重1.16盐酸，加入蒸馏水成1000ml） 20ml
偏重亚硫酸钠                               1g
碱性品红1g加入200ml蒸馏水，搅拌加热沸腾，待冷却至50℃过滤，加入当量盐酸至25℃时加入偏重亚硫酸钠。置于暗处，两天后溶液变桔黄色或草黄色，然后加入少量活性碳并震荡、过滤，此时溶液应为无色。保存冰箱备用。溶液如显浅红色或草黄色，染色效果较差。

作者: bagelo 时间: 2007-2-10 11:43 标题: 回复 #4 ylzhao 的帖子

谢谢了，我要自己配置=）

作者: bagelo 时间: 2007-3-1 17:22 标题: 回复 #4 ylzhao 的帖子

版主,我按照你的方法配制了PAS,但是失败了,配完后避光放置了两天溶液是深棕色,加了活性碳也没什么变化,过滤之后还是深棕色,是什么原因呢,请教一下.谢谢了

作者: ylzhao 时间: 2007-3-8 15:19

配制方法不会有问题,配制时选用纯度高的试剂.

作者: bagelo 时间: 2007-3-9 10:56

我看了试剂包装，都是分析纯的,用超纯水配的

作者: wsqin326 时间: 2007-3-25 23:29

可以参考杜卓民主编的<最新实用组织学技术>中关于糖原染色的方法,里面有详细的介绍关于Schiff试剂的配制方法.个人认为配好后冷却至室温,加入活性炭后就可以马上过滤了,不用避光2天后再过滤.具体请参考杜卓民老师书中的方法,我按书中的方法配出的试剂相当好用,而且在4度可以保存3个月以上.

作者: aksshujie 时间: 2007-5-23 19:59

用冷配法比较好。所用东西都一样，不过我们使用蒸馏水的量是174毫升，亚硫酸氢钠是3.8克。当量盐酸是1毫升盐酸加蒸馏水到12毫升。按前面那个配方依次加入容器。最好是棕色瓶，实在没有，可以用纸包起来。剧烈震摇2小时，加活性炭1克，震摇十分钟到半小时，过滤便可使用。活性炭不可加过多，亚硫酸氢钠不能少加。滤出颜色如为淡黄色，是活性炭吸附时间太短。最重要的是所有器具必须用蒸馏水冲洗干净。试剂之所以会失效，主要是因为亚硫酸氢钠的那种略刺鼻气味的消失或减弱。如果有兴趣，就试试看吧。

作者: bagelo 时间: 2007-7-16 09:33

好久没上来了,又看到了新方法，我会试试看的,谢谢了

作者: jakjone 时间: 2007-8-10 08:55

热配法比较好用

作者: cassie 时间: 2007-10-27 00:24

不成功的原因也可能是其他的环节出问题吧
比如过碘酸的染色时间控制不好或是冲水时间过长等等
你再试试吧~

作者: strongerlife 时间: 2007-11-17 13:37 标题: 回复 #10 aksshujie 的帖子

呵呵有空的时候给你说一下我们的使用我们的效果姣好

作者: dingwei 时间: 2007-11-17 20:55

二个方法都没问题，相比较，冷配法比较好。

作者: cucat7 时间: 2007-12-13 20:45

我用的是热配法,自我感觉配出的挺好用的,用一年以上是没问题的.
重点是容器要洗干净,而且要是干燥的.
包括以后染色的时候,都得用干燥的试管来吸取.

作者: 方与圆 时间: 2008-1-2 21:42

[quote]原帖由 bagelo 于 2007-1-24 22:25 发表

PAS染色不上色是什么原因呢？试剂是从公司买的，以前用还很好用，最近几次染色颜色都很浅或者几乎没颜色，是不是温度的问题，以前我在室温染半小时，颜色很好。雪夫试剂是应该放在4℃保存吗？用之前恢复到室温。还和 ... [/quot]
除了shiff试剂外，还要注意过碘酸氧化、环境温度、孵育要盖紧以防挥发。

作者: strongerlife 时间: 2008-1-6 11:35 标题: 回复 1# 的帖子

这个还跟你的过碘酸有关我们用的白复红从来没染那么久但是效果很好拿来染肾穿标本淋巴结都没问题啊你看看你的过碘酸

作者: strongerlife 时间: 2008-1-6 11:38 标题: 回复 17# 的帖子

你的肾穿的染的还可以啥但是淋巴结就不行了啊还有那个染隐球菌的你可以用亮绿衬染一下啥那样比红色衬染对比更好看这样都是红色的对比就不好看了

作者: 方与圆 时间: 2008-1-6 22:44

引用:

原帖由 strongerlife 于 2008-1-6 11:38 发表
你的肾穿的染的还可以啥但是淋巴结就不行了啊还有那个染隐球菌的你可以用亮绿衬染一下啥那样比红色衬染对比更好看这样都是红色的对比就不好看了

上传几张图片看看，让大家学习学习

作者: lyyy687 时间: 2008-9-22 13:33 标题: 求助大鼠**PHS-H染色方法及步骤。

求助大鼠**PHS-H染色方法及步骤。求助大鼠**PHS-H染色方法及步骤。

作者: ssnhwang 时间: 2009-9-4 11:30

引用:

原帖由 ylzhao 于 2007-2-4 09:39 发表
试剂配制：
（1）0.5%过碘酸（HIO4）水溶液或70%酒精溶液。
（2）Schiff氏试剂。
碱性品红 1g
蒸馏水 200ml
1N盐酸（9 ...

我在主页看见的PAS染色用到的偏重亚硫酸钠是1.5克，怎么这里又变成了1克了呢？？

作者: ylzhao 时间: 2009-9-5 16:53

没有错,大家用的资料来源不同所以不完全相同,这不影响试剂的效果.最多用到2克.

http://web.swhospital.com/blk/web/row.asp?Key_id=2380
http://wxyjhx.col.ynu.edu.cn/syzl/PDF/2.pdf

作者: dwlabc2004 时间: 2010-3-30 20:50

作者: histotechnology 时间: 2010-9-15 08:39 标题: 回复 7# 的帖子

碱性品红的染料索引号不对吧

作者: luo 时间: 2010-11-20 09:28

学习一下，没有注意4度冰箱保存使用前还需恢复至室温。

作者: labcy 时间: 2010-11-30 22:47

我们用热配法效果比较好。配制后避光第二天就可以加入活性碳过滤了，但活性碳的量一定要加够，不然过滤后就会出现发黄现象。

作者: 九日 时间: 2010-12-11 15:12

我现在正在染PAS，摸索几次，发现时试剂的问题，碱性品红效果不好，盐基品红很好。不用加活性碳就是清亮的液体，好用极了

作者: encounter 时间: 2011-5-9 23:46

学习学习

作者: yuxuewen365 时间: 2011-6-24 19:26 标题: 回复 17# 的帖子

你好，我单位现开展肾穿工作，PAS一直染色很淡，没有贵单位的颜色鲜艳，雪夫试剂不管是新配的还是旧的，一直都很淡，很头疼，希望有时间可以赐教一下，另外，不知道贵公司的masson三色最后一步是用亮绿还是苯胺蓝染的？我看过香港的，人家最后一步用的是亮绿，我们主任觉得很好，希望可以和他们做的一样，我试了，亮绿如果染的鲜艳的话，丽春红就褪色了，如果想丽春红不退色，亮绿就不能染时间长，也就只绿不亮了，希望有时间可以好好请教一下。望不吝赐教PAS及三色的详细染色步骤。不胜感激。我的邮箱：yuxuewen365@126.com

作者: yuxuewen365 时间: 2011-6-24 19:27 标题: 回复 17# 的帖子

你好，我单位现开展肾穿工作，PAS一直染色很淡，没有贵单位的颜色鲜艳，雪夫试剂不管是新配的还是旧的，一直都很淡，很头疼，希望有时间可以赐教一下，另外，不知道贵公司的masson三色最后一步是用亮绿还是苯胺蓝染的？我看过香港的，人家最后一步用的是亮绿，我们主任觉得很好，希望可以和他们做的一样，我试了，亮绿如果染的鲜艳的话，丽春红就褪色了，如果想丽春红不退色，亮绿就不能染时间长，也就只绿不亮了，希望有时间可以好好请教一下。望不吝赐教PAS及三色的详细染色步骤。不胜感激。我的邮箱：yuxuewen365@126.com

作者: weili1027 时间: 2011-7-28 21:54

学习学习

作者: gagawow 时间: 2011-7-29 00:00 标题: 回复 31# 的帖子

我们也是这个问题，两种颜色不好把握，此若彼强，此强彼弱！

作者: 老莫more 时间: 2011-8-26 22:55 标题: 回复 31# 的帖子

PAS染色淡的原因有可能是因为你的过碘酸时间控制不好
我是这样认为的过碘酸作为氧化剂将-c-c-键打开生成醛基是为了更好的跟雪夫试剂结合
然而氧化剂选择过碘酸而不是高锰酸钾或者过氧化氢是因为其不会对已经氧化生成的醛基再进一步的氧化
因此我建议你可以将过碘酸染色15至25分钟左右这样进行充分氧化让雪夫试剂更好的着色
masson的话
harris苏木素5分钟水洗反蓝
丽春红染20分钟以上不要水洗直接用0.5%冰醋酸冲洗再用磷钼酸速洗（这部很关键是为了固定之前的染色）
加2%亮绿染色10分钟左右直接用冰醋酸冲洗
最后过无水酒精（时间不要太长）和二甲苯透明

这是我的个人经验不知道对你有没有帮助具体时间还要看你们试剂配制的情况每次使用前都要回温

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