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标题: 标记CD68分子不显色的问题 [打印本页]

作者: panjero 时间: 2007-2-1 12:43 标题: 标记CD68分子不显色的问题

各位老师好：
我使用的是美国Lab vision公司生产的试剂，CD68 Ab-3（Clone KP1）。
无论修复还是不修复，即使是对阳性对照组织（扁桃体）进行标记都不显色。
说明书中注明使用Protease XXV(蛋白酶25？？)进行修复，我不知道这是什么酶，但使用胰酶修复无效。
我不是病理专业，所以有些问题不懂，操作过程中使用双氧水不知道对结果有没有影响。

作者: shanghainese 时间: 2007-2-3 12:24

说明书里写得很清楚。

作者: shanghainese 时间: 2007-2-3 12:31

Immunohistology (formalin/paraffin) (Ab 1:100-200 for 30 min at RT)
* [For staining of formalin-fixed tissues, digest sections with Protease XXV at 1mg/ml PBS for 5 minutes
at 37°C (Cat. #AP-9006)]

作者: lijie208239 时间: 2007-2-3 19:46

你是不是省了哪一步，不然是不会出现这种现象的，CD68我也经常做，每次结果都是很好的。

作者: panjero 时间: 2007-2-4 14:09 标题: 操作流程

我也不知道我的操作有没有问题，但标记其他的抗原都成功了，只有cd68不行。
我用的是两步法，操作流程大体是这样的：烤片8h/脱蜡10min/清水冲洗/去离子水冲洗/双氧水浸泡10min/去离子水冲洗/胰酶消化5min-10min/微波修复20min或者省略此步/pbs液洗2*4min/加一抗常温2小时或者 37度1小时/pbs液洗2*4min/加二抗37度20min/pbs液洗2*4min/加DBA显色。

作者: shanghainese 时间: 2007-2-5 05:14

要用 Protease XXV， 1mg/ml PBS 在 37°C 消化 5 分钟。
你要按照说明书上说得做.

作者: 咖啡豆 时间: 2008-4-23 01:42

引用:

原帖由 shanghainese 于 2007-2-5 05:14 发表
要用。
你要按照说明书上说得做.

请教shanghainese老师，“Protease XXV， 1mg/ml PBS 在 37°C 消化 5 分钟”，我不太明白1mg/ml 是指什么呢？是说protease的浓度还是PBS的浓度呢？
Protease XXV——还有其他的名称么？
还有，“Ab 2-4ug/ml for 30min at RT”请问，RT是什么意思呢？
新手上路，很多简单的东西都不太懂，希望能够在这里跟各位前辈多学习。

[ 本帖最后由咖啡豆于 2008-4-23 01:47 编辑 ]

作者: shanghainese 时间: 2008-4-23 11:50

引用:

原帖由 咖啡豆 于 2008-4-23 01:42 发表

请教shanghainese老师，“Protease XXV， 1mg/ml PBS 在 37°C 消化 5 分钟”，我不太明白1mg/ml 是指什么呢？是说protease的浓度还是PBS的浓度呢？
Protease XXV——还有其他的名称么？
还有，“Ab 2-4ug/ml ...

1mg/ml 是指Protease XXV 在PBS里的浓度。

RT是室温的英文缩写。

作者: clffjfz 时间: 2008-4-26 15:37

我也遇到了标记CD68分子不显色的问题，是大鼠石蜡标本，也没用Protease XXV。已经去订Protease XXV了。用了Protease XXV是否一定能解决问题？！不知一楼的仁兄解决问题了没有？CD68一抗用的是哪个批号？是一抗的问题吗？

作者: clffjfz 时间: 2008-4-26 15:40

请问lijie208239老师，您经常做CD68是否也用Protease XXV修复？

作者: shanghainese 时间: 2008-4-27 01:01

引用:

原帖由 clffjfz 于 2008-4-26 15:37 发表
我也遇到了标记CD68分子不显色的问题，是大鼠石蜡标本，也没用Protease XXV。已经去订Protease XXV了。用了Protease XXV是否一定能解决问题？！不知一楼的仁兄解决问题了没有？CD68一抗用的是哪个批号？是一抗的问题 ...

您用的是什么一抗？

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