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标题: 求助--小鼠胚胎13.5天的冰冻脑切片 [打印本页]

作者: aniseed 时间: 2007-3-24 18:00 标题: 求助--小鼠胚胎13.5天的冰冻脑切片

请各位老师指教,先鞠躬

我是取出胚胎后,整个胚胎用1xPBS配制的4%的多聚甲醛4度固定(母鼠未进行灌流固定),做过10小时和21小时的固定时间,然后放入30%蔗糖里在4度脱水,沉底后取出,稍微沾去多余的蔗糖溶液,即放入含有OCT的包埋盒.然后,将包埋盒放入液氮预冷的异戊烷液体中,待OCT完全凝结15秒后,随后连包埋盒一起放入-70度冰箱保存.
要切片时,将样品从冰箱里取出,在-20度的冰冻切片机箱体内用OCT粘在载物台上.待样品温度平衡后开始切片.

现在的问题是,我切16um的厚度,很容易卷片.而且这种厚度的切下来后,神经组织总是会垂直室管膜裂开,而且细胞比较密集的地方也会裂开.同一切片的非神经组织就没有这种现象.
不知道怎么解决?

我自己试过不用蔗糖脱水,或是OCT薄薄一层覆盖组织在-20度包埋,效果都不好.

而且,我如果想切5um左右的厚度,切下来的薄片就都堆在切片刀附近,展不开.这个有什么好方法解决么?

作者: shanghainese 时间: 2007-3-25 00:34

请个专家帮您做吧!

作者: folksmile 时间: 2007-3-25 00:35 标题: ‘垂直室管膜裂开’

有照片没？前端的olfactory bulb是分开的。

作者: aniseed 时间: 2007-3-25 10:12

引用:

原帖由 shanghainese 于 2007-3-25 00:34 发表
请个专家帮您做吧!

哎,这个...导师不会答应的.

作者: aniseed 时间: 2007-3-25 10:21

引用:

原帖由 folksmile 于 2007-3-25 00:35 发表
有照片没？前端的olfactory bulb是分开的。

就是类似这种样子的.

好丑陋的图片的.

作者: aniseed 时间: 2007-3-25 10:24 标题: 回复 #3 folksmile 的帖子

不好意思,图片上怎么上传呢,我比较土,不大会用的.
是一定要把照片上传到什么地方,然后再把连接拷过来么?

作者: folksmile 时间: 2007-3-25 16:13

不好意思，我也不会上传；丁老师发过一个帖子教上传的，好像我的‘快速回复主题’是没有那些功能的；顺便也请教一下丁老师，谢谢！

作者: folksmile 时间: 2007-3-25 16:17

我明白了，发表新话题时可以附加图片的。

作者: aniseed 时间: 2007-3-26 09:38

引用:

原帖由 folksmile 于 2007-3-25 16:17 发表
我明白了，发表新话题时可以附加图片的。

好象还是不行的,插入图片的地方总是让我输入URL.

作者: folksmile 时间: 2007-3-29 08:30

现在的问题是,我切16um的厚度,很容易卷片.而且这种厚度的切下来后,神经组织总是会垂直室管膜裂开,而且细胞比较密集的地方也会裂开.同一切片的非神经组织就没有这种现象.
不知道怎么解决?

Still have problem? Try different Tm & adjust u anti-roll bar. Check if there any bur on the blade? Clean u microtome knife thoroughly before u use it. Compare u method with that of peers'. Change it if it is necessary. Good luck.

作者: folksmile 时间: 2007-3-29 08:33

By the way, always play with sham control before u find u feet.

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