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标题: H2O2加在切片上为什么会起泡? [打印本页]

作者: zhba0918 时间: 2007-4-6 15:06 标题: H2O2加在切片上为什么会起泡?

各位老师:
我在做组化,用H2O2处理切片时为什么有的切片为什么会出现气泡,有的则没有?
对免疫组化有什么影响?

期待回复!谢谢!

作者: fangdang 时间: 2007-4-6 22:50

起泡通常是切片中红细胞过多。如果用甲醇作为溶剂可以解决气泡问题。

作者: 蓝斑 时间: 2007-6-4 15:16 标题: 回复 #2 fangdang 的帖子

我做组化的时候也出现过这种现象，看到版主的回复才明白咋回事啊，呵呵。谢谢！
不过我也用过甲醇配过氧化氢，但是切片（大鼠脑片，20 um漂片）会皱缩到一起！另外，就算使用蒸馏水做溶剂，仍然会出现皱缩现象，现在我只好用PBS做溶剂。
请问版主为什么会出现我遇到的皱缩现象呢？用PBS做溶剂应该没有什么影响吧？

P.S. 终止DAB染色反应的时候如果用蒸馏水，脑片也会皱。这时再将脑片丢进PBS中，会恢复平整。

谢谢！

作者: fangdang 时间: 2007-6-5 09:33

用蒸馏水、PBS、甲醛来配置过氧化氢都可以，只要能把组织中的内源性过氧化物酶完全灭活即可－－－组织片加了过氧化氢后再加DAB不显色。

作者: meizhou 时间: 2007-6-5 12:02

引用:

原帖由蓝斑于 2007-6-4 15:16 发表
我做组化的时候也出现过这种现象，看到版主的回复才明白咋回事啊，呵呵。谢谢！
不过我也用过甲醇配过氧化氢，但是切片（大鼠脑片，20 um漂片）会皱缩到一起！另外，就算使用蒸馏水做溶剂，仍然会出现皱缩现象， ...

皱缩是不是因为前面没有固定好啊？

作者: 蓝斑 时间: 2007-6-6 13:05 标题: 回复 #5 meizhou 的帖子

我也考虑过是否是固定的原因。但是皱了的片子放回PBS中还能平整回来，这看起来是个跟渗透压相关的现象。是吗？
谢谢meizhou的意见。

作者: meizhou 时间: 2007-6-6 17:10

我的QQ号码是55323032，欢迎大家和我讨论细胞凋亡检测方法的实验经验和心得，欢迎赐教。身份验证请注明细胞凋亡。

作者: shanghainese 时间: 2007-6-8 12:15

引用:

原帖由蓝斑于 2007-6-6 13:05 发表
我也考虑过是否是固定的原因。但是皱了的片子放回PBS中还能平整回来，这看起来是个跟渗透压相关的现象。是吗？
谢谢meizhou的意见。

是不是前面没有固定？

作者: 蓝斑 时间: 2007-6-11 09:47

我是用多聚甲醛灌流固定过的，难道是我没固定好？请问shanghainese老师：固定不好是如何引起皱片的呢？

是不是前面没有固定？ [/quote]

作者: shanghainese 时间: 2007-6-11 11:27

引用:

原帖由蓝斑于 2007-6-11 09:47 发表
我是用多聚甲醛灌流固定过的，难道是我没固定好？请问shanghainese老师：固定不好是如何引起皱片的呢？

是不是前面没有固定？

甲醛灌注固定技术性比较高，灌注固定不好的事时有发生。
没有看过您操作，不傲下结论。只是怀疑而已。

作者: 蓝斑 时间: 2007-6-11 13:38

引用:

原帖由 shanghainese 于 2007-6-11 11:27 发表

甲醛灌注固定技术性比较高，灌注固定不好的事时有发生。
没有看过您操作，不傲下结论。只是怀疑而已。

嗯，明白。可能我说的不是很清楚，我不是说我固定的就是很好，只是我想了解，如果固定不好，为什么脑片会在水或者甲醇中皱掉，又在pbs中平整回来呢？这个原理大概是个什么样子呢？

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