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标题: 阴性对照与阳性的是一样的，怎么办？ [打印本页]

作者: chocolateice 时间: 2007-4-9 19:30 标题: 阴性对照与阳性的是一样的，怎么办？

我用SABC法，3%H2O2，30min；胰酶修复，30min；5%BSA，1h；一抗4度过夜；二抗、三抗各30min。
不知道是哪里出了问题，阴性对照与阳性片子总是一样的，真是急人，请大家帮帮忙，看是哪里出的问题，应该怎么改动，才好
先谢过了！

作者: fangdang 时间: 2007-4-9 22:38

说明这些可能是检测试剂盒的假阳性表达。不加一抗不加二抗直接加酶其他条件不变做个实验来证实一下，如果是检测试剂盒的问题就好解决，1。提前封闭内源性生物素。2。把你现在的试剂盒更换成非生物素系统就可以了。

作者: chocolateice 时间: 2007-4-10 08:06

好的，我一会试试。

提前封闭内源性生物素是什么意思，在哪一步之前封闭／?

作者: shanghainese 时间: 2007-4-11 11:58

请把照片转上来让我们看一看。

作者: chocolateice 时间: 2007-4-11 12:46

还是不太明白，我的是石蜡切片，girlly的意思是在修复前用5%BSA封闭吗？
还有如何能知道抗体是否污染？

作者: chocolateice 时间: 2007-4-11 12:55

怎么发照片？

作者: chocolateice 时间: 2007-4-11 13:32

一抗是兔抗人的，二抗是山羊抗兔的，我用试剂盒里的BSA封闭的，用正常山羊血清也封闭过，但感觉没有BSA好
另外我用5%H2O2的背景要清晰一些

作者: chocolateice 时间: 2007-4-11 13:36

To fangdang：不加一抗和二抗只加酶的结果与全都加的结果是一样的！
你说的提前封闭内源性生物素是指将5%BSA用在修复之前吗？

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