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标题: 请教如何配制4%多聚甲醛及0.2MPBS配方 [打印本页]

作者: ybnasa 时间: 2007-6-3 14:36 标题: 请教如何配制4%多聚甲醛及0.2MPBS配方

本人想做大鼠心肌组织的免疫组化。不知是用0.1M的PB还是用0.01MPBS，或者是用0.1M的PBS,哪种比较好。
再想请教一下2000ml 0.2M的PBS配方(用Na 2 HPO 4 12H 2 O 和Na H 2 PO 4 2H 2 O 配制）

谢谢各位老师！

作者: leefly 时间: 2007-9-20 09:34

4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.3）:
该固定剂较适于光镜免疫细胞化学研究，最好是动物经灌注固定取材后，继续浸泡固定2～24h。另外，该固定剂较为温和，适于组织标本的较长期保存。

　　试剂：多聚甲醛　　　　　　　　　　40g

　　0.1mol/L磷酸缓冲液　　　　　　　　至1000ml

　　配制方法：称取40g多聚甲醛，置于三角烧瓶中，加入500～800ml 0.1mol/L磷酸缓冲液（Phosphate Buffer以下简称PB），加热至60℃左右，持续搅拌（或磁力搅拌）使粉末完全溶解，通常需滴加少许1n NaOH才能使溶液清亮，最后补足0.1mol/L的PB于1000ml，充分混匀。

作者: leefly 时间: 2007-9-20 09:35

4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢氧化钠:
该固定剂适于光镜和电镜免疫细胞化学研究，用于免疫电镜时，最好加入少量新鲜配制的戊二醛，使其终浓度为0.5%～1%。该固定剂较温和，适于组织的长期保存。组织标本于该固定液中，4℃冰箱保存数月仍可获得满意的染色效果。

　　试剂：A液：多聚甲醛　　　　40g

　　蒸馏水　　　　　　　　　　400ml

　　B液：Na2HPO4·2H2O　　　　16.88g

　　蒸馏水　　　　　　　　　　300ml

　　C液：NaOH　　　　　　　　　3.86g

　　蒸馏水　　　　　　　　　　200m

　　配制方法：A液最好在500ml的三角烧瓶中配制（方法同前），至多聚甲醛完全溶解后冷却待用。注意，在溶解多聚甲醛时，要尽量避免吸入气体或溅入眼内。B液和C液配制好后，将B液倒入C液中，混合后再加入A液，以1n NaOH或1N HCl 将pH调至7.2～7.4，最后，补充蒸馏水至1000ml充分混合，4℃冰箱保存备用。

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