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标题: 求助小鼠CD8免疫组化问题 [打印本页]

作者: flowing_water 时间: 2007-7-5 10:38 标题: 求助小鼠CD8免疫组化问题

免疫组化（石蜡）测小鼠肿瘤中CD8+CTL浸润情况，一抗为Biolengend的大鼠抗小鼠CD8a（克隆号：53-6.7），结果很不理想，换个一抗测巨噬细胞，其他所有试剂都一样，结果很好。

是CD8抗体的问题吗？请各位前辈帮忙分析。
有谁用过这个公司的抗体，或测过小鼠CD8，请前辈们帮忙。

我的染色步骤：(SP试剂盒、DAB均为中山的，二抗为羊抗大鼠IgG)

常规脱蜡至水－－水洗，3％H2O2阻断－－柠檬酸抗原修复－－封闭－－－一抗4℃过夜－－复温－－二抗－－过氧化物酶标记的链酶亲和素－－DAB显色－－苏木素复染－－分化－－脱水透明。

说明书：
Purified anti-mouse CD8a
Product Data Sheet
Catalog #Size:  100701 / 50 µg
                  100702 / 500 µg
Clone: 53-6.7
Isotype: Rat IgG2a, κ
Immunogen: Mouse thymus or spleen
Reactivity: Mouse
Preparation: The antibody was purified by affinity chromatography.
Formulation: Phosphate-buffered solution, pH 7.2, containing 0.09% sodium azide.
Storage: The antibody solution should be stored undiluted at 4°C.

Applications
Applications: FC, IHC(Frozen/ Paraffin), IP
Application：Additional reported applications (for the relevant formats）include:
Notes: immunoprecipitation, in vivo and in vitro cell depletion3, inhibition of CD8 T cell proliferation4, blocking
      of cytotoxicity，and immunohistochemical staining of acetone-fixed frozen sections, zinc-fixed paraffin-       embedded sections and 10% formalin-fixed paraffin-embedded sections. The 53-6.7 antibody
         competes with 5H10-1 antibody (Cat. No. 100802) for binding to thymocytes4. The LEAF™
         purified antibody (Endotoxin <0.1 EU/μg, Azide-Free,0.2 μm sterile-filtered) is recommended for
      functional  assays (Cat. No. 100716).

[ 本帖最后由 flowing_water 于 2007-7-5 10:44 编辑 ]

作者: shanghainese 时间: 2007-7-5 11:45

这个克垄的抗体不能用于10%福尔马林固定的石蜡切片上.

作者: flowing_water 时间: 2007-7-5 15:58

说明书上说可以的阿“and 10% formalin-fixed paraffin-embedded sections. ”

还有参考文献，Effects of Dietary Restriction on Spontaneous
Dermatitis in NC/Nga Mice

不知道问题出在哪，：（

作者: shanghainese 时间: 2007-7-6 12:06

问题出在根本就不能用.
你不信,可以去问问Biolengend(用中文就可以了,不必用英文).

作者: flowing_water 时间: 2007-7-6 15:02

斑竹我问了Biolegend

说可以，让我看上面说的那篇参考文献，10％福尔马林，克隆号53-6.7

迷茫中……

作者: shanghainese 时间: 2007-7-7 12:12

引用:

原帖由 flowing_water 于 2007-7-6 15:02 发表
斑竹我问了Biolegend

说可以，让我看上面说的那篇参考文献，10％福尔马林，克隆号53-6.7

迷茫中……

此事我只能点道这里为止,请您原谅. 您要的信息我全给您了,您自己把握着办.
那篇参考文献不知您看了没有? 不过您要小心,千万别拿小日本的东西当真了.

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