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标题: 完了，我的脱钙液和固定液都是直接加的DEPC,各位高手帮帮忙啊 [打印本页]

作者: 我是帮帮糖 时间: 2007-8-24 21:19 标题: 完了，我的脱钙液和固定液都是直接加的DEPC,各位高手帮帮忙啊

由于实验事先没准备好，作的动物标本固定液（多聚甲醛）和脱钙液（加了TRIS的EDTA）都是直接加的DEPC，今天才看见不能这么加，怎么办啊，实验都做完了，就等做切片出结果了，后期的免疫组化和原位杂交是不是什么都做不出来啊，有没有高手指点一下呢，真的急得跳楼的心都有拉

作者: 我是帮帮糖 时间: 2007-8-24 21:45

有没有同学遇到过这种问题啊，帮帮忙啊，有啥挽救得办法没

作者: dingwei 时间: 2007-8-25 15:15

完了，没有挽救办法，固定是不可逆的。

作者: 我是帮帮糖 时间: 2007-8-26 20:21

那是不是指我后面的免疫组化和原位杂交都做不了呢，还是只是原位杂交做不了，免疫组化可以做呢，那我现在按照正常的脱钙行不行啊，就是用DEPC水来配脱钙液呢，一点都没挽救的办法吗

作者: 我是帮帮糖 时间: 2007-8-26 20:22

高手救命啊

作者: 我是帮帮糖 时间: 2007-8-26 20:54

还有就是，丁老师，我的DEPC加入后并没有混匀，只是滴在表面上，请问这样是不是相当于没有加呢，如果标本完了的话明年真的就没办法毕业啦，我该怎么办呢，丁老师帮帮我啊

作者: dingwei 时间: 2007-8-26 22:34

前面我以为你时间很长了，如果时间不长，脱钙和固定放在一起是没关系的，效果很好。当务之急赶快看一下有没有脱钙过了，如果没有，应该没有关系，快脱钙、脱水包埋，不管好不好用，先试一下了。脱钙后要流水冲洗数小时。

作者: 我是帮帮糖 时间: 2007-8-26 22:36

但是有些标本脱钙还没脱好啊，是骨头和牙齿的标本

作者: dingwei 时间: 2007-8-26 22:39

那没关系，我们也是特意固定和脱钙一起做的。

作者: 我是帮帮糖 时间: 2007-8-26 22:41

一共三组标本，最长的一组已经三个多月了，但是脱钙还是没脱完，因为牙齿脱钙时间要求长，差不多还要一个月才脱得完，另外两组标本都是2个于和1个月

作者: 我是帮帮糖 时间: 2007-8-26 22:42

我不是固定和脱钙一起做啊，我是先固定，再脱的钙，只是脱钙了这么就现在才发现TRIS溶液里不能直接加DEPC，郁闷哦

作者: 我是帮帮糖 时间: 2007-8-26 22:45

丁老师，那你觉得现在是用正确的方法配的DEPC水来配脱钙液后继续脱钙呢，还是直接脱水包埋，如果脱钙没脱够的话我怕直接脱水包埋切片切不了，是狗的牙齿和牙槽骨，脱钙不彻底的话切不动呢

作者: 我是帮帮糖 时间: 2007-8-26 23:19

在线焦急的等

作者: dingwei 时间: 2007-8-26 23:20

正确的方法 DEPC水来配脱钙液后继续脱钙

作者: 我是帮帮糖 时间: 2007-8-26 23:27

这是不是也是现在唯一的办法了啊，还有就是对后面的免疫组化和原位杂交结果有没有影响是不是也只有试试才知道啊，唉，抗体好贵哦，如果不行的话抗体也报废啦，老板会把我杀了的

作者: 我是帮帮糖 时间: 2007-8-26 23:28

谢谢丁老师，在百忙中还抽空来回答我这些笨问题，论坛里肯定需要你帮助的人很多呢，

作者: 我是帮帮糖 时间: 2007-8-26 23:44

还有一点问题啊，丁老师，我重新脱钙前要不要把标本拿水冲一下呢，把以前残留的一些东西冲掉呢

作者: czs000 时间: 2008-4-14 17:17

牙齿应该先做成磨片在脱钙
而骨头标本应该先锯成薄片在进行脱钙。
一般进行了以上处理取材的标本后期脱钙最多也就3天，一般1天就可以细针穿过了。
脱钙本来就应该和脱钙一起进行。
不过我的经验是骨头做免疫组化一般效果不是十分理想。

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