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标题: 细胞学免疫组化 [打印本页]

作者: lijie208239 时间: 2007-11-7 18:58 标题: 细胞学免疫组化

最近我尝试着对胸腹水进行免疫组化染色 ,背景很深.我用的是北京的既用型试剂SP三步法.

作者: shanghainese 时间: 2007-11-9 10:55

怎么做的？

作者: lijie208239 时间: 2007-11-23 19:00

我用酒精固定30分钟后水洗，然后就用H2O2室温处理15分钟。血清封闭30分钟，后加一抗，4摄氏度过夜。以后就同常规了。。谢谢你的帮助。。

作者: shanghainese 时间: 2007-11-24 13:42

试一试用丙酮固定。
另外，胸腹水里的细胞都不新鲜了，容易产生背景。

作者: lijie208239 时间: 2007-11-24 18:39

谢谢你的帮助。我回想以下有可能是我在滴加一抗是用没有清洗的盖玻片盖在玻片上，我想这样可以防止抗体丢失，是涂片变干。没想到会有这种情况。还王老师能给一指示。我们科就我一个人做。也没有个可以商量的。。谢谢了。

作者: lijie208239 时间: 2007-11-24 19:42

我还问一下，要是想对细胞涂片进行保存以后在做免疫组化，大概能保存多久？希望能帮助解决。谢谢了

作者: shanghainese 时间: 2007-11-25 11:15

引用:

原帖由 lijie208239 于 2007-11-24 18:39 发表
谢谢你的帮助。我回想以下有可能是我在滴加一抗是用没有清洗的盖玻片盖在玻片上，我想这样可以防止抗体丢失，是涂片变干。没想到会有这种情况。还王老师能给一指示。我们科就我一个人做。也没有个可以商量的。。 ...

你最好放在湿盒里来防止抗体丢。
背景高的原因不少。可以是抗体浓度过高，孵育时间过长，DAB 显色过长等等。

作者: shanghainese 时间: 2007-11-25 11:17

引用:

原帖由 lijie208239 于 2007-11-24 19:42 发表
我还问一下，要是想对细胞涂片进行保存以后在做免疫组化，大概能保存多久？希望能帮助解决。谢谢了

保存在负八十度的冻箱里。

作者: lijie208239 时间: 2007-11-28 19:37

xie谢谢了以后我会小心的

作者: shanghainese 时间: 2007-11-29 03:47

引用:

原帖由 lijie208239 于 2007-11-24 18:39 发表
谢谢你的帮助。我回想以下有可能是我在滴加一抗是用没有清洗的盖玻片盖在玻片上，我想这样可以防止抗体丢失，是涂片变干。没想到会有这种情况。还王老师能给一指示。我们科就我一个人做。也没有个可以商量的。。 ...

没关系, 不用担忧.
以后有什么问题上这里来讨论.

作者: sixflag123 时间: 2008-2-27 23:19

没遇见过

[ 本帖最后由 sixflag123 于 2008-2-28 13:02 编辑 ]

作者: bagelo 时间: 2008-2-28 16:31

细胞的组化一定不要让片子干了，放在湿盒里做，抗体可以多加一些，另外可以试试两步法的试剂盒，有生物素放大的Kit就容易有背景，显色的时间也不好控制，经常滴上DAB就一下子都有颜色了。
细胞涂片制备好的片子，固定之后可以放在－20或－30度保存，但是一个月之后阳性结果的强度会明显降低，我没再试过－80保存，或者更长时间的保存结果会怎样。建议不要保存太长时间。

作者: hedongcao 时间: 2008-3-6 17:10 标题: 版主是不是上海的?

版主是上海的不?我马上要做实验了,请多指教啊.......

作者: kuosheng_ksia 时间: 2008-3-6 19:48

求教: 我做细胞爬片,常温下用4%多聚甲醛固定10min,之后用S-P超敏试剂盒进行抗原检测,请问版主,细胞化学中多聚甲醛固定后可否省去抗原修复?

作者: kuosheng_ksia 时间: 2008-3-6 20:02

补充一点:我是用盖玻片(6孔板)做爬片,固定后用中性树胶将盖玻片粘在载波片上,然后放在染色架上进行高温高压修复,高压后发现盖玻片全掉修复液里了,前功尽弃啊.

如果必须进行修复,有没办法不"掉片"?急需帮助

作者: shanghainese 时间: 2008-3-7 00:10

引用:

原帖由 hedongcao 于 2008-3-6 17:10 发表
版主是上海的不?我马上要做实验了,请多指教啊.......

版主是上海人。

作者: shanghainese 时间: 2008-3-7 00:14

引用:

原帖由 kuosheng_ksia 于 2008-3-6 19:48 发表
求教: 我做细胞爬片,常温下用4%多聚甲醛固定10min,之后用S-P超敏试剂盒进行抗原检测,请问版主,细胞化学中多聚甲醛固定后可否省去抗原修复?

是否省去抗原修复要根据一抗而定。
有些一抗需要抗原修复，有些一抗不需要抗原修复。

作者: shanghainese 时间: 2008-3-7 00:17

引用:

原帖由 kuosheng_ksia 于 2008-3-6 20:02 发表
补充一点:我是用盖玻片(6孔板)做爬片,固定后用中性树胶将盖玻片粘在载波片上,然后放在染色架上进行高温高压修复,高压后发现盖玻片全掉修复液里了,前功尽弃啊.

如果必须进行修复,有没办法不"掉片"?急需帮助

用这种片子，但比较贵。
http://www.bdbiosciences.com/ptProduct.jsp?prodId=364812

作者: shanghainese 时间: 2008-3-7 00:19

kuosheng_ksia，你为何要用4%多聚甲醛固定，而不用丙酮固定？

作者: bagelo 时间: 2008-3-7 09:28 标题: 回复 15# 的帖子

可以用酶修复啊，胰酶和胃酶都可以。细胞爬片不象石蜡片，石蜡片在制片的过程中对抗原有一定的影响，需要通过修复充分暴露抗原，细胞爬片不用那么剧烈的热修复，你试试酶修复吧。如果是丙酮固定则不需要修复，甲醛和多聚甲醛固定后会有抗原发生耦联，会影部分响抗原抗体结合

作者: kuosheng_ksia 时间: 2008-3-7 11:13

我需要检测Ts,TP,MDR3,p-gp等耐药相关蛋白在肿瘤细胞株(非耐药株)中表达情况,前两者主要定位于胞浆,后两者定位于胞膜\胞浆;前面提到的4%多聚甲醛固定参考了<抗体技术指南>和师兄意见.

期待版主详细介绍下抗原定位检测与固定剂选择的关系.........

作者: shanghainese 时间: 2008-3-7 11:14

引用:

原帖由 bagelo 于 2008-3-7 09:28 发表
可以用酶修复啊，胰酶和胃酶都可以。细胞爬片不象石蜡片，石蜡片在制片的过程中对抗原有一定的影响，需要通过修复充分暴露抗原，细胞爬片不用那么剧烈的热修复，你试试酶修复吧。如果是丙酮固定则不需要修复，甲醛和 ...

作者: shanghainese 时间: 2008-3-7 11:18

引用:

原帖由 kuosheng_ksia 于 2008-3-7 11:13 发表
我需要检测Ts,TP,MDR3,p-gp等耐药相关蛋白在肿瘤细胞株(非耐药株)中表达情况,前两者主要定位于胞浆,后两者定位于胞膜\胞浆;前面提到的4%多聚甲醛固定参考了和师兄意见.

期待版主详细介绍下抗原定位检测与固定剂选 ...

不知道您所用的一抗是否可以用在多聚甲醛固定的细胞上。请您仔细看一下说明书。

作者: kuosheng_ksia 时间: 2008-3-7 11:27

一抗是科里病理室用来做组织化学的,说明书上说"适用于福尔马林固定的石蜡切片和冰冻切片",老板的让我直接拿来做细胞化学以节省经费,迈新的产品.

作者: kuosheng_ksia 时间: 2008-3-7 11:34

丙酮固定是用甲醇和丙酮1:1混合液?做实验没多久,很多不懂

作者: shanghainese 时间: 2008-3-7 11:43

丙酮固定是用纯丙酮。

作者: kuosheng_ksia 时间: 2008-3-7 11:48

谢谢指点

作者: 加冰地可乐 时间: 2009-6-2 20:36

要是细胞学免疫组化诊断可以出现方案的话，这样将会对治疗有很大很好的帮助，顶～！！

作者: guoyk 时间: 2009-12-27 16:43

直接用丙酮固定就不用抗原修复和双氧水封闭了，我们平时做免疫组化要热修复的原理就是因为组织经过甲醛固定后，产生蛋白交联，需要高压把其打开，以暴露抗原决定簇，细胞学没有必要经过甲醛。

作者: 冰雪 时间: 2009-12-29 21:28

引用:

原帖由 shanghainese 于 2008-3-7 11:43 发表
丙酮固定是用纯丙酮。

我个人感觉用丙酮固定，有时细胞收缩得很厉害、细胞变形。

作者: shanghainese 时间: 2009-12-30 12:47

引用:

原帖由冰雪于 2009-12-29 21:28 发表

我个人感觉用丙酮固定，有时细胞收缩得很厉害、细胞变形。

没有掌握好丙酮固定的方法,会造成细胞收缩得很厉害、细胞变形。但是与福尔马林固定相比,丙酮固定细胞收缩要弱得多了。

作者: 冰雪 时间: 2009-12-30 20:31

先谢啦！

本人在这方面一直做得不是很好，向版主请教。

作者: xyd204 时间: 2010-1-17 21:35 标题: 盖玻片

放在专用盖玻片染色架就行

作者: brian627 时间: 2013-5-6 20:54

非常好，谢谢

作者: gfei 时间: 2014-1-20 22:27 标题: 回复 1# 的帖子

我们胸腹水一般会离心后，一部分涂片染 HE ，一大部分多次高速离心石蜡包埋做成蜡块儿用来做免疫组化及其他检查，也会出现背景染色，甚至于出现表达异位，调整染色条件后，经多次试染色效果还是比较满意的，切片也比较容易保存。

作者: gfei 时间: 2016-3-30 21:27 标题: 回复 15# 的帖子

细胞爬片，一般只对表达在核的抗体对标本打孔处理后进行染色。石蜡标本需要抗原修复是因为福尔马林固定液导致蛋白胶连。爬片在培养过程中没有这个过程，修复的目的又是什么呢？一定要进行修复，可以选择酶消化的方式？要不然把爬片直接放在EP管一类的容器中隔水修复。个人意见。

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