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标题: 求助:脑组织固定后的保存 [打印本页]

作者: nwsuafwxp    时间: 2007-11-26 12:10     标题: 求助:脑组织固定后的保存

[size=1]我用4%的多聚甲醛灌注后快速取脑,我想一个月后集中做冰冻切片切片,做免疫组化,应该怎样处理?怎样保存?我有下面2个方案,不知哪个可行?
(1)取脑后,在4%的多聚甲醛中存放1个月,然后30%蔗糖脱水,快速冷冻,做免疫组化。
(2)取脑后,在4%的多聚甲醛中后固定过夜,30%蔗糖脱水,液氮冷冻保存1个月,冷冻切片,做免疫组化。
另外:后固定时间一般多长?30%蔗糖是用什么来配?PBS、4%的多聚甲醛还是蒸馏水?

非常感谢!

作者: shanghainese    时间: 2007-11-27 10:11

新鲜为佳。
现做现用。
作者: nwsuafwxp    时间: 2007-11-28 22:41

我是没有办法,得借别人的切片机,所以才集中到一起了,有没有更好一点的建议啊?
作者: 蓝斑    时间: 2007-12-3 12:17

个人认为:

1)一般不可取,多聚甲醛固定过久对一抗识别不利。

2)没用过液氮保存。倒是看到很多直接在蔗糖溶液中保存的,但看到的蔗糖保存溶液浓度ms是15或者20,记不清了,你自己查查吧。

一般后固定过夜即可,4 hrs、6 hrs也没什么问题,应该跟抗原的性质有关,可参考抗体说明书。一般不超过24 hrs。

蔗糖用PBS配制。
作者: Pulidia    时间: 2008-1-26 15:52

印象里,蔗糖溶液是用来脱水用的,不是保存作用的吧?一般都是说把组织放入蔗糖液再放到4度冰箱里等待组织沉底后,就表示脱水彻底了。可以只用一个浓度的蔗糖溶液进行脱水,也可以配制几个梯度的蔗糖溶液进行梯度脱水。




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