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标题: 请给为高手帮忙解决软骨组织作免疫组化为什么脱片，谢谢！ [打印本页]

作者: cristal66 时间: 2008-2-1 22:43 标题: 请给为高手帮忙解决软骨组织作免疫组化为什么脱片，谢谢！

最近在做软骨组织的免疫组化，但是一直搞不懂为什么总是脱片，郁闷很久，也差了很多资料，还是解决不了。谢谢各位帮忙指导！急！

作者: liuyong 时间: 2008-2-12 13:44

请注意三方面的问题
玻片的处理
组织的处理
切片的厚度

作者: cristal66 时间: 2008-2-15 01:53

谢谢！切片厚度4um，多聚甲醛固定48hr以上，玻片10%多聚赖氨酸涂片。10分钟枸橼酸缓冲液煮沸。但是还是有部分脱片。请指正！

作者: zhouweinjysd 时间: 2008-2-15 10:15

我个人认为是脱水的原因。

作者: cristal66 时间: 2008-2-15 16:09

脱水？时间我们是2min-100%乙醇；1min-95-90-80-70%乙醇，难道短了？

作者: 方与圆 时间: 2008-2-21 22:48

引用:

原帖由 liuyong 于 2008-2-12 13:44 发表
请注意三方面的问题
玻片的处理
组织的处理
切片的厚度

作者: ChenRong 时间: 2008-2-27 15:34

引用:

原帖由 cristal66 于 2008-2-15 01:53 发表
谢谢！切片厚度4um，多聚甲醛固定48hr以上，玻片10%多聚赖氨酸涂片。10分钟枸橼酸缓冲液煮沸。但是还是有部分脱片。请指正！

厚度3，固定好流水洗时间长点，试试吧！

作者: lijie208239 时间: 2008-3-2 21:16

我感觉流水冲洗直观重要。最好用中性的PBS在泡下。当然厚度也不可忽视。烤片温度及时间也要把握好。热修复更是得注意，因为软骨不想软组织。

作者: bagelo 时间: 2008-3-3 08:15

切片之后60度烤1小时，做组化之前60度再烤2～3小时，我还烤过过夜。如果还是脱片的话，把多赖的浓度加大些，我们用过sigma的多赖，而且用的是原液，还用过涂过两遍胶的片子，效果好了很多，因为组织要用高锰酸钾脱色素，再做组化很容易掉片，所以试了很多方法，你也可以试试。

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