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标题: 请给为高手帮忙解决软骨组织作免疫组化为什么脱片,谢谢! [打印本页]

作者: cristal66    时间: 2008-2-1 22:43     标题: 请给为高手帮忙解决软骨组织作免疫组化为什么脱片,谢谢!

最近在做软骨组织的免疫组化,但是一直搞不懂为什么总是脱片,郁闷很久,也差了很多资料,还是解决不了。谢谢各位帮忙指导!急!
作者: liuyong    时间: 2008-2-12 13:44

请注意三方面的问题
玻片的处理
组织的处理
切片的厚度
作者: cristal66    时间: 2008-2-15 01:53

谢谢!切片厚度4um,多聚甲醛固定48hr以上,玻片10%多聚赖氨酸涂片。10分钟枸橼酸缓冲液煮沸。但是还是有部分脱片。请指正!
作者: zhouweinjysd    时间: 2008-2-15 10:15

我个人认为是脱水的原因。
作者: cristal66    时间: 2008-2-15 16:09

脱水?时间我们是2min-100%乙醇;1min-95-90-80-70%乙醇,难道短了?
作者: 方与圆    时间: 2008-2-21 22:48

引用:
原帖由 liuyong 于 2008-2-12 13:44 发表
请注意三方面的问题
玻片的处理
组织的处理
切片的厚度

作者: ChenRong    时间: 2008-2-27 15:34

引用:
原帖由 cristal66 于 2008-2-15 01:53 发表
谢谢!切片厚度4um,多聚甲醛固定48hr以上,玻片10%多聚赖氨酸涂片。10分钟枸橼酸缓冲液煮沸。但是还是有部分脱片。请指正!
厚度3,固定好流水洗时间长点,试试吧!
作者: lijie208239    时间: 2008-3-2 21:16

我感觉流水冲洗直观重要。最好用中性的PBS在泡下。当然厚度也不可忽视。烤片温度及时间也要把握好。热修复更是得注意,因为软骨不想软组织。
作者: bagelo    时间: 2008-3-3 08:15

切片之后60度烤1小时,做组化之前60度再烤2~3小时,我还烤过过夜。如果还是脱片的话,把多赖的浓度加大些,我们用过sigma的多赖,而且用的是原液,还用过涂过两遍胶的片子,效果好了很多,因为组织要用高锰酸钾脱色素,再做组化很容易掉片,所以试了很多方法,你也可以试试。




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