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标题: 免疫荧光问题。急 [打印本页]

作者: gter1983 时间: 2008-5-19 20:46 标题: 免疫荧光问题。急

同学的试验遇到瓶颈了，向大家请教一下：

他做的是小鼠卵巢某特异性蛋白的表达。使用的是免疫荧光法，蓝光激发，阳性
结果应该是绿色。但所有阴性对照（未加一抗）仍然可以照出绿色荧光，大家都说这是
卵巢的自发荧光现象，不加荧光素都能照出荧光来。这样就很难辩认哪里是阳性结果，
哪里是自发荧光了。
下面怎么做才能解决这个问题呢？怎样才可以去除组织的自发荧光呢，加组织自发荧光
猝灭剂会影响抗原抗体反应吗？达人指教。谢谢。

作者: diaoruiying 时间: 2008-7-1 08:16

概述：许多组织会产生可透过各种波长滤光片的内源性自发荧光，显著干扰抗体标记荧光观察甚至导致荧光组化染色失败。自发荧光淬灭试剂中的离子可用碰撞方式捕获自发荧光光源分子发出的电子，阻止该电子从激发态回归基态并阻止能量释放，从而淬灭自发荧光。采用优化的孵育时间，可以最大限度地消除自发荧光而不明显影响抗体标记的荧光。

适用：各种组织、细胞免疫荧光染色的自发荧光消除。特别适用神经组织自发荧光淬灭。

储存：4ºC避光。

使用方法：
1. 吸去PBS或相应洗涤缓冲液，用蒸馏水短暂冲洗组织切片或位于细胞培养板中的细胞。
2. 加入适量但充足的自发荧光淬灭剂，覆盖组织切片或瓶皿中的细胞。室温孵育10-90min。
3. 吸去自发荧光淬灭剂，用蒸馏水短暂冲洗。
4. 吸去蒸馏水，用PBS覆盖组织切片或位于细胞培养板中的细胞。
5. 封片。建议使用抗荧光衰减封片剂(Cat#: SC1210)，可防止抗体标记荧光衰退。
6. 荧光显微镜观察。

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