标题:
关于铜的染色法
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作者:
ylzhao
时间:
2008-6-9 13:16
标题:
关于铜的染色法
Timm’s
铜染色法
固定：福尔马林固定或新鲜组织
技术方法：石蜡切片或冰冻切片
试剂：
液体
A
：
5%
硝酸银水溶液
液体
B
：对苯二酚
2.0g
，
柠檬酸
5.0g
，
蒸馏水
100ml
，液体可以贮存在
4
℃
暗处一个月。
步骤：
1．
石蜡切片脱蜡至水
2．0.5%
硫化铵
5min
3．
充分水洗
4．
用
0.1N
盐酸
2-3min
祛除铁和
硫化锌液（
15%
三氯醋酸也可以使用）
5．
水洗
6．
切片置新鲜
1
份
A
液和
5
份
B
液过滤后使用，将硫化铜转化为硫化银
3min
就可以完成。
7．
水洗
8．
脱水，透明，封固
结果：铜沉积物被染成黑色
Comments:
The following control procedures should be employed with contguous sections. (1)Omit step 6.
(3)Treat With 0.5% potassium cyanium cyanide before developing to remove copper sulfide.(4)Stain with Perl’s method for iron.
铜染色（
Copper stain
）
原理：铜若丹明法比
红氨酸法更敏感，然而，
若丹明法被证实是蛋白与铜相结合而不是与铜本身结合。因此，尽管我们认为此法具有更高的敏感性，但是有可能因其特异性低于若丹明法从而得到假阳性结果。
注意：在以下步骤中这些化学品对健康有害：若丹明害处更多的信息可以参考安全数据表。
1．
若丹明饱和储存液
若丹明（
D# 90
）
*0.2g
纯酒精
100ml
注释：确保容器底部出现结晶直到液体饱和到血红色。
*
目录中列出的若丹明“（
P-Dimethylaminobenzalrhodanine
）”或“
5[p(Dimethylamino)benzylidene]rhodanine
”可以互相代替。
2
．若丹明工作液
饱和若丹明储存液
1.5ml
蒸馏水
50ml
注释：测量并混合前应摇荡储存液。加到载玻片上之前也要摇荡工作液。使用后丢弃。
3．Gill’s
苏木精（见
H&E
染色步骤）
对照：知道肝和脾有大量的铜
步骤：
1．
切片脱蜡至水
2．
切片在若丹明工作液立式染色缸内
37
℃
过夜或
56
℃
2
小时
3．
蒸馏水充分水洗
4．Gill’s
苏木精染核
1min
5．
自来水返蓝，不能用氨水返蓝（
NH40H
）
6．
充分蒸馏水洗
7．
脱水，透明，永久封固剂封固
结果：
铜颗粒亮红或红
-
**，细胞核淡蓝色。组织中铜浓度低，染色后盖上盖玻片颜色会稍微褪色。
若丹明铜微波步骤
若丹明工作液
若丹明贮存液
5ml,
蒸馏水
45ml
1．
切片脱蜡至水
2．
将切片放入
50ml
若丹明工作液，把探针放入液中，调
TEMP/KOOK/HOLD
微波炉功率到
4
水平的
135
然后按开始
3．
当温度达到了搅拌液体调
10min
4．
充分蒸馏水洗
5．
切片用
Harris’s
苏木精染
1min
6．
充分水洗
7．
自来水冲洗返蓝
8．
蒸馏水洗
9．
脱水，透明，封固
结果：铜颗粒亮红或红
-
**，细胞核淡蓝色。
仅供参考
[
本帖最后由 ylzhao 于 2008-6-9 13:23 编辑
]
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