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标题: 伊红染色不太好，该如何解决？ [打印本页]

作者: fydapg 时间: 2008-9-21 06:49 标题: 伊红染色不太好，该如何解决？

伊红染色不太好，该如何解决？各位大侠：

   我做的是小鼠胚胎脑组织切片！
   我用的伊红配方是沉淀酸化伊红Y乙醇液，但是最后封片观察发现，伊红染色特别淡，请大家帮助解决，谢谢！我的切片浸入伊红染液的上一步是在95%乙醇浸泡3分钟。下面是我染色的详细时间步骤，各位老师能否帮我修正一下。
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二甲苯1-------------------------8 min
二甲苯2-------------------------8 min
无水乙醇------------------------2 min
95%乙醇-------------------------2 min
75%乙醇-------------------------2 min
自来水洗
苏木精浸染----------------------5——10 min Gill改良苏木素液
自来水洗
1%盐酸乙醇分化---------------数秒
自来水洗
50℃温水蓝化-------------------1 min
自来水洗
95%乙醇-------------------------3 min
伊红染色-------------------------3——10秒沉淀酸化伊红Y乙醇液
自来水洗
脱水——透明——封固：
95%乙醇--------------------- 2秒
无水乙醇-------------------- 5秒
无水乙醇--------------------3~5秒
无水乙醇--------------------1min
二甲苯1---------------------5 min
二甲苯2---------------------5 min
中性树胶封固、晾干（制片流程结束）

封片后，我最后发现伊红染的很淡，苏木精染的还可以；
还有切片从伊红染液里出来后，要不要经过水洗这一步骤？还有我这染色步骤有没有哪地方需要改动的？

作者: hb19880803 时间: 2008-9-29 13:20

个人觉得是伊红的时间短了，一般我是浸染1到2分钟的，你可以试下看看效果。

作者: hb19880803 时间: 2008-9-29 13:21

还有就是伊红出来不要水洗的。

作者: czs000 时间: 2008-9-29 20:22

伊红的时间段啦！1-3秒除非你用的实超高浓度伊红。
一般1---2%的水伊红好歹也要在里面待个30-60秒。
出来后最好下水洗下，要不搞的脱水的第一岗酒精都是红的，到时三缸脱水酒精出来后，片子周围到处都是红的-----------脏

作者: 郑 时间: 2008-10-3 01:24

不是伊红的问题啊！因为伊红被后面的几道酒精脱色了，可能都是新换的酒精吧！

作者: 小文dd 时间: 2008-10-21 20:51

你看看你的伊红如果是用无水酒精配的就不要过水了

作者: 花开花落 时间: 2008-10-24 00:29

你的做法有好多错误！首先你的伊红是酒精溶性的，你从伊红出来不该用水洗！其次，低浓度的酒精有脱色的作用，你在九五酒精里的时间有点长！可以涮一下就出来！然后在无水里脱水吧！这是我的建议！还有就是如果感觉颜色确实还很淡，可以增加伊红的浓度！

作者: liujun0304 时间: 2008-10-25 12:18

支持花开花落的说法！
还有可以延长伊红的时间。我做的是乳腺组织，一般在25秒到30秒，
如果伊红过了，可在95酒精中改变时间来控制！

作者: liujun0304 时间: 2008-10-25 12:20

哦
小鼠的脑组织我也做过
伊红25秒
还可以可以自己试试！

作者: iamyueyueyue 时间: 2008-11-12 15:09

加长伊红的时间试一试

作者: iamyueyueyue 时间: 2008-11-12 15:10

加长伊红的时间试一试

作者: 陈某 时间: 2008-11-14 16:44

伊红3分钟，不要水洗，进入80%酒精、90%的酒精各10秒，95%酒精1分钟。

作者: huatuo70 时间: 2008-11-15 18:08

E怎么也得2分钟以上吧

作者: lijie208239 时间: 2009-3-26 20:53

一分钟左右就行了你也太快了

作者: 刘振伟 时间: 2009-9-3 13:57

伊红的时间比较短，另外只在无水中停留长时间，其他均一进一出。
供参考

作者: 郑 时间: 2009-9-3 19:47 标题: 回复 5# 的帖子

楼上说的对:伊红被酒精脱色了

作者: 利国 时间: 2009-9-11 07:55

伊红染色时间延长

作者: guwujiangxia 时间: 2009-9-24 11:15

伊红时间太短了，酒精溶性的伊红后面不能用水洗，而是过几道酒精就可以了！支持花开花落的意见！

作者: scncoyzh 时间: 2009-10-21 22:04

我觉得不管是水溶的，还是醇溶的，伊红后还是应该水洗下，水洗只是把多余的伊红洗干净，没有退色的效果吧？！水洗后再过酒精，这样才能保证片子的背景干净。

作者: jiaguotao 时间: 2009-10-23 14:14

引用:

原帖由 scncoyzh 于 2009-10-21 22:04 发表
我觉得不管是水溶的，还是醇溶的，伊红后还是应该水洗下，水洗只是把多余的伊红洗干净，没有退色的效果吧？！水洗后再过酒精，这样才能保证片子的背景干净。

shui水溶性怡红！在含水酒精内脱色是很明显的，含水的酒精水分越多，脱色越厉害！
试试才知道！

作者: scncoyzh 时间: 2009-11-17 20:46

引用:

原帖由 jiaguotao 于 2009-10-23 14:14 发表

shui水溶性怡红！在含水酒精内脱色是很明显的，含水的酒精水分越多，脱色越厉害！
试试才知道！

我知道啊，含水的酒精水分越多，脱色越厉害，但是在水里，脱色也很厉害吗？你水洗后，把片子上的水甩干，让后再从低到高过酒精，这样背景才干净。如果你直接伊红后就进低浓度酒精，难道你想把酒精变成伊红二号？
伊红里面加入了冰醋酸的话，伊红的色是不大容易脱去的，如果真有那么容易，那么你就该检讨一下你的伊红液或者你那几缸不知道用了多久的酒精了。

作者: jiaguotao 时间: 2009-11-18 15:27

楼上的哥们：我没提到不过水啊，何来伊红二号？
我检讨：没犯错啊！
你在伊红里面加入冰醋酸是不错，我很多年前就知道此方法。增强伊红着色力，可是明显的是人为的因素，改变了组织本身的原有吸附伊红量的多少的能力，就像打了兴奋剂似的，打了之后成绩肯定很好！但是是药暂时改变了人的正常能力。正常能力能达到如此的改良效果吗？你用此方法咱不反对！如果想达到理想的单纯的伊红染色效果，此方法可以用！但是鄙人不用！再者你加入冰醋酸的量的比例反复试验过多少次？最理想的比例有没有记住？多试验几次你可能会体会到最佳浓度！
冰醋酸的伊红染出来是不是那种颜色的红好丑啊？知道为什么吗？在酒精里面掉色是不是很厉害？

作者: zhangwei 时间: 2009-11-18 16:01

苏木染色后分化很重要，核染好了，伊红颜色很好上色的，红蓝适当，其次伊红不要在梯度酒精时间过长。

作者: jiaguotao 时间: 2009-11-19 15:04

引用:

原帖由 zhangwei 于 2009-11-18 16:01 发表
苏木染色后分化很重要，核染好了，伊红颜色很好上色的，红蓝适当，其次伊红不要在梯度酒精时间过长。

不错，同意！建议不要在低浓度酒精呆的时间太长！

作者: 翩跹 时间: 2010-6-28 16:55

我想请问一下各位老师为什么要在伊红前面加一道95%酒精啊？能起什么作用吗？原理是什么啊？谢谢

作者: 皑皑雪 时间: 2010-8-27 17:18 标题: 回复 24# 的帖子

我想请问一下为什么要在伊红前面加一道95%酒精啊？能起什么作用吗？原理是什么啊？谢谢

作者: gao314159 时间: 2010-11-17 16:44

之前的95%乙醇没有必要，其次伊红的染色时间也过短，30秒左右才可以，另外脱水的乙醇时间也不够。醇溶性的伊红上色应该挺稳定的。

作者: lehoushu 时间: 2010-11-18 09:33

伊红染色时间偏短，因伊红使用的是醇溶，所以在脱水时也容易脱色

作者: qimin 时间: 2010-11-23 22:07 标题: 回复 1# 的帖子

伊红时间短、伊红出来不能水洗

作者: xiaoniou777 时间: 2010-12-1 17:16

低浓度酒精有脱色作用，在低浓度酒精停留时间短点。

作者: heroy 时间: 2011-1-4 20:10

经验很重要，基础更重要！

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