中华病理技术论坛 - Powered by Discuz! Board

标题: 急！新手求助：冰冻切片HE染色掉片 [打印本页]

作者: lizi2965 时间: 2008-10-8 17:47 标题: 急！新手求助：冰冻切片HE染色掉片

我是第一次做HE染色，在操作过程中老掉片，请教高手问题在哪？
标本：大鼠脊髓，振动切片，50微米，已固定4度保存。
材料：多聚赖氨酸处理的防脱皮载玻片。染缸。
步骤将组织黏附在玻片上，室温（25度左右）晾干，.蒸馏水洗数秒

1.切片进入苏木素溶液中 2~5min
2.流动自来水洗 2~5min
3.0.5%盐酸酒精分化 1~2秒
4. 流动自来水洗 1~2min
5.0.5%淡氨水蓝化切片 0.5~1min
6. 流动自来水洗 5~10min
7.镜检着色满意后进入蒸馏水洗
8.切片进入0.5%伊红溶液中 1~5min
9.切片进入蒸馏水中速洗 1~2秒
10. 切片进入75%酒精 5min
11. 切片进入85%酒精 5min
12. 切片进入95%酒精 5min
13. 切片进入无水酒精 5min
14. 切片进入无水酒精 10min
15. 切片进入二甲苯 10min
16. 切片进入二甲苯 10min
17.中性树胶封片这是完整的步骤，可是我做到第4及第5步的时候就开始掉片，更郁闷的是还有进入二甲苯还脱片。我上网看了一些资料，说可以在黏附之前把玻片加热或黏附后用酒精灯烤15秒，也不知道是否正确，请各位高手指点。

作者: 郭党学 时间: 2008-10-12 22:25

可以在烤片机略烤

作者: lizi2965 时间: 2008-10-14 21:15

谢谢，我试过了，放温箱一夜就可以了，

不过这么厚的片子能做HE染色吗

作者: zhww626090 时间: 2008-10-15 20:43

你切的片子太厚了,冰冻切片脊髓10微米即可

作者: 花开花落 时间: 2008-10-24 00:22 标题: 可能是比较厚，而且可以先烤一烤的！

冰冻切片太厚就是容易掉片，适当切薄一点，然后切完了不要直接进行染色！需要烤一下，如果技术不够，就放在摊片机上烤！感觉表面干了差不多就可以进行染色了吧！试试！

作者: dingwei 时间: 2008-10-24 10:26

用烤片的方法做的冰冻切片细胞肯定褪变很严重，这是一个非常错误的方法。冰冻切片应该立即固定。我不知你的固定液选择了什么？

欢迎光临中华病理技术论坛 (http://bbs.zhbljs.com/bbs/)