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标题: 请教：PAS染色中的头痛问题！ [打印本页]
作者: colin    时间: 2008-12-1 16:52     标题: 请教：PAS染色中的头痛问题！

        各位老师
                 您们好！向各位请教个问题。这几天配制雪夫试剂一直没有成功。方法是按照书本上的。碱性品红和偏重亚硫酸钠都是新买的。
               Shiff染液：将蒸馏水100ml煮沸后冷至80℃，加入0.5g的碱性品红，冷却后过滤，煮至50℃时加入1N的盐酸10ml，，冷却至25℃左右加入焦亚硫酸钠0.7g，黑暗中储存过夜，加活性碳1g，摇1分钟放置一会后过滤。
              1N盐酸现用现配：92ml水+8ml浓盐酸。
               自己分析了一下可能的原因：1、盐酸浓度不够。2、碱性品红过期。（我们买的是结晶状的，呈淡绿或者说墨绿稍微再淡点） 偏重亚硫酸钠为粉末状，有味道。
              从肾脏病理书上看到可以直接用亚硫酸钠配制，省掉了加盐酸和偏重亚硫酸钠的步骤。 请问各位老师有这样配制过吗？配制过程需要避光吗？迫切希望能够得到各位老师的指导。本人万分感谢 ！
作者: ylzhao    时间: 2008-12-2 12:11

配制过程需要避光吗？不需要。
作者: shanghainese    时间: 2008-12-2 13:36

引用:
原帖由 colin 于 2008-12-1 16:52 发表
        各位老师
                 您们好！向各位请教个问题。这几天配制雪夫试剂一直没有成功。方法是按照书本上的。碱性品红和偏重亚硫酸钠都是新买的。
               Shiff染液：将蒸馏水100ml煮沸后冷至8 ...


[ 本帖最后由 shanghainese 于 2008-12-3 01:45 编辑 ]
作者: 丁香花    时间: 2008-12-8 10:25     标题: Shifft试剂的配置

配置方法是按书本上来的，将200ml蒸馏水加热煮沸后，加入碱性品红，冷却到50摄氏度后加入20ml当量的盐酸，为什么加入盐酸之后溶解不了，成了红色沉淀物。当量盐酸到底怎么配制。
作者: shanghainese    时间: 2008-12-10 05:32

浓盐酸是12个当量。1：12稀释就成了1当量的盐酸。
作者: colin    时间: 2008-12-10 15:10

引用:
原帖由 shanghainese 于 2008-12-2 13:36 发表

储存过夜一定要密封好，不然溶液里的二氧化硫跑了就配不好雪夫试剂。加活性碳1g，摇1分钟放置一会后过滤后的滤液应该是无色透明。如果显红色说明没配好。滴一滴无色透明的雪夫试剂到一盆水里。如果水由无 ...
唉又配了两次，照您老说的，可能是我们的盐酸的量的问题；可是有的又是按照摩尔浓度计算也同样能配制成功。想请教一下，当量浓度是不是和摩尔浓度有本质的区别！
作者: jiangchengzi    时间: 2008-12-23 19:26

1000ml蒸馏水里加入82.5ml的盐酸即成1N盐酸
作者: shanghainese    时间: 2008-12-24 00:13

引用:
原帖由 colin 于 2008-12-10 15:10 发表
      唉又配了两次，照您老说的，可能是我们的盐酸的量的问题；可是有的又是按照摩尔浓度计算也同样能配制成功。想请教一下，当量浓度是不是和摩尔浓度有本质的区别！
1当量浓度的盐酸=1摩尔浓度盐酸
作者: shanghainese    时间: 2008-12-24 00:13

引用:
原帖由 jiangchengzi 于 2008-12-23 19:26 发表
1000ml蒸馏水里加入82.5ml的盐酸即成1N盐酸
您用的是多少浓度的盐酸？
作者: colin    时间: 2008-12-30 10:46

引用:
原帖由 shanghainese 于 2008-12-24 00:13 发表

您用的是多少浓度的盐酸？
浓盐酸好像都是37％的！
作者: colin    时间: 2008-12-30 10:52

前面去请教了当地的一位老师， 他们用的是 Shiff染液快速制法：碱性品红0.25克充分溶解于100ml蒸馏水中，加浓盐酸1ml.,搅拌一分钟，倒入装亚硫酸氢钠的1.5克的棕色瓶中，振荡3分钟，置于4度冰箱。立即可用。作用时间15到30分钟。该科室一直用这种方法配制多年。结果用我们的试剂原材料配，不行。看来是我们的试剂问题！
作者: shanghainese    时间: 2008-12-31 01:33

引用:
原帖由 colin 于 2008-12-30 10:46 发表
浓盐酸好像都是37％的！
37％的浓盐酸是12当量。
作者: dingwei    时间: 2009-1-1 16:38

配制1N的HCL 1000 ml ，需浓HCL多少ml ？
   
                    M x 分子量                             1 x 36.46
  =  ——————————————  =  —————————  =  82 .8 ml
        化合价x 比重 x 百分浓度               1 x 1.19 x 37%
作者: dingwei    时间: 2009-1-1 16:40

引用:
原帖由 colin 于 2008-12-30 10:52 发表
前面去请教了当地的一位老师， 他们用的是 Shiff染液快速制法：碱性品红0.25克充分溶解于100ml蒸馏水中，加浓盐酸1ml.,搅拌一分钟，倒入装亚硫酸氢钠的1.5克的棕色瓶中，振荡3分钟，置于4度冰箱。立即可用 ...
这个方法是冷配法，效果也不错，但应该用偏重亚硫酸钠，而不是亚硫酸氢钠。
作者: rongye_xj    时间: 2009-1-1 21:42

学习了，我的PAS也是一直配的zuobuchulai
作者: colin    时间: 2009-2-17 08:47

引用:
原帖由 dingwei 于 2009-1-1 16:40 发表
这个方法是冷配法，效果也不错，但应该用偏重亚硫酸钠，而不是亚硫酸氢钠。
谢谢老丁 再试一试！
作者: 学海    时间: 2010-1-14 21:59

想问一下楼主，活性炭在哪里能买到？
作者: colin    时间: 2010-1-28 17:10     标题: 回复 17# 的帖子

设备科帮忙购买的好像是北京的吧！
这东西应该是很好买的了！
最终结果：冷配法 效果不错！
作者: flyaqmt    时间: 2010-7-31 11:44

我们的PAS一直没配成功，郁闷，碱性品红是进口的，偏重亚硫酸钠是新买的，还有刺鼻的味道
作者: histotechnology    时间: 2010-8-2 08:24     标题: 回复 18# 的帖子

首先碱性品红有三种，只有染料索引号是CI42500的是配制Shiff试剂的，其次是配好的Shiff试剂滴在甲醛中立即便色，说明Shiff试剂较好，如果不能立即变色说明试剂不好。
作者: 八爪鱼    时间: 2010-8-8 19:22     标题: 回复 1# 的帖子

1N盐酸:浓盐酸(比重1.19)   8.4ML蒸馏水加至100ML
作者: colin    时间: 2010-9-25 16:23

引用:
原帖由 histotechnology 于 2010-8-2 08:24 发表
首先碱性品红有三种，只有染料索引号是CI42500的是配制Shiff试剂的，其次是配好的Shiff试剂滴在甲醛中立即便色，说明Shiff试剂较好，如果不能立即变色说明试剂不好。
其实真不知道还有这一说，刚看了一下试剂瓶，也不知道是啥，不知道前辈能否指点一下！
作者: 小飞侠2010    时间: 2011-1-30 22:37     标题: 回复 5# 的帖子

当量浓度(N) 溶液的浓度用1升溶液中所含溶质的克当量数来表示的叫当量浓度，用符号N表示。（英文：normality） 当量浓度
　　溶液的浓度用1升溶液中所含溶质的克当量数（gram-equivalent number）来表示的叫当量浓度，用N表示。
　　当量浓度=溶质的克当量数/溶液体积（升）
　　克当量数=质量/克当量
　　克当量（gram-equivalent weight）实际上是指物质的基本摩尔单元的摩尔质量。 相当于现在的物质的量，比如36.5克的HCI的克当量为1，98克的H2SO4的克当量为2。
　　当量=原子量/化合价， 若原子量采用克原子量时，则当量就成为克当量。
克原子量就是现在常说的原子量。举例子：
1L浓盐酸（37%，密度1.19g/ml）的当量浓度为：首先求克当量数=质量/克当量=1.19×1000×37%/36.5=440.03/36.5=12.063；当量浓度=溶质的克当量数/溶液体积（升）=12/1=12N
作者: 小飞侠2010    时间: 2011-1-30 22:50     标题: 配制100ml 0.1mol/L的盐酸需要37%的盐酸多少毫升？

设需要浓盐酸Vml。注：37.5%通常为质量比，也就是说100g浓盐酸中含有37.5g纯盐酸；盐酸的分子量M=36.46.是需要您记住的。
解题思路：需要找等量关系。通常稀释前与稀释后的溶液，浓度不同，但是所含纯物质的质量是相同的。
稀释前：体积Vml，质量百分数37.5%，密度1.19g/ml。
m=V×密度，即V×1.19g/ml=稀释前浓盐酸的质量。
浓盐酸质量×质量百分数=纯盐酸质量，即：V×1.19g/ml×37.5%=纯盐酸质量。
稀释后：浓度0.1mol/L. 100ml/1000=0.1L。0.1L×0.1mol/L=纯盐酸物质的量n。n=m/M
m=n×M=0.1×0.1×36.46
所以：V×1.19g/ml×37.5%=100/1000×0.1×36.46
V=0.816ml  约需要浓盐酸0.8ml.
作者: 小飞侠2010    时间: 2011-2-22 12:24     标题: 回复 18# 的帖子

你好，你配制成功的配制方法是？？？？？可否指导一下呢？染色效果如何？
作者: huage5401    时间: 2011-2-22 14:37

作者: 新手妈妈    时间: 2011-4-28 14:02

我以前用的Shiff染液没有加活性炭，也不过滤，让它自然沉淀后直接用上清液染色，效果不错。后来加活性炭过滤，效果怎么都不太好，反反复复做了很多次，最后在过滤后的Shiff染液中再加一些偏重亚硫酸钠，效果很好。本人觉得应该是在过滤的过程当中偏重亚硫酸钠挥发了一些，你可以试试看。
作者: 新手妈妈    时间: 2011-4-28 14:08

还有就是高碘酸，你们天天用可以放室温，用的不多放冰箱，但是用之前要先恢复室温效果才好。
作者: 王华    时间: 2011-4-28 19:28

高碘酸的质量非常重要，就算Schiff试剂配得再好，使用质量差的高碘酸，粘多糖氧化不充分，PAS肯定做不好的！
我们科曾经发生过“劣质高碘酸事件”，所有PAS全部失败！
鉴别优质高碘酸：透明细结晶状，看起来有点像碘盐。如果不是结晶体，肯定质量不行！
高碘酸氧化要充分：室温15分钟~20分钟。



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