标题: 免疫荧光求助 [打印本页]

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作者: 6504339    时间: 2009-2-20 15:10     标题: 免疫荧光求助

步骤：
1.切片脱蜡至水
2.抗原修复（4张用柠檬酸99℃水浴加热10分钟自然冷却，4张用TE在37℃孵育30分钟）
3.PBS冲洗3×3min
4.滴加抗体C3（1：50和 1：100）37℃孵育1h
5.PBS冲洗3×4min
8张切片均未出现阳性（片子是阳性片）加PI后细胞核成红色
希望各位老师指点下我错在什么地方？谢谢！

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作者: colin    时间: 2009-2-26 16:12

石蜡做荧光应该注意两点：
               1、抗原修复液用专用的EDTA（二胺四乙酸）PH8.0 微波705--800W或者中央加热十分钟。    或者胃蛋白酶修复： 滴加0.4%胃蛋白酶 PH 2 湿盒内37度孵育10分钟，PBS洗。               
              2、根据抗体要求稀释抗体。
仔细看了一下您的步骤  发现脱蜡至水后应该PBS洗，还有就是孵育时间稍微短点。一般都用30分钟足够。 还有就是最好用无关动物血清封闭一下，组化做荧光不是很敏感！
    希望对您有帮助！

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